论文内蒙古2016-2018年度流行性感冒流行病学及病原学研究


    蒙古20162018年度流行性感流行病学病原学研究
    目 录

    中文摘 1
    英文摘 3
    1 前言 6
    11 流行性感提出 6
    12 研究背景意义 6
    2 试验材料方法 7
    21 流感样病例流行病学监测 7
    22 流感病毒实验室检测 8
    23 流感病毒基测序 13
    24 流感病毒耐药性检测 13
    3 试验结果 13
    31 流行病学监测结果 13
    311 总体情况 13
    312 时间分布 14
    313 群分布 14
    314 区分布 14
    32 病原学监测 15
    321 总体情况 15
    322 优势株变化 15
    323 性分布 15
    324 区分布 15
    33 抗原结果 19
    34 流感病毒全基源性分析结果 19
    341 新甲型H1N1基源性分析结果 19
    342 季节性H3N2基源性分析结果 20
    343 流感病毒基序列进化树分析结果 20
    35 流感病毒耐药性分析结果 25
    4 讨 26
    41 流行病学监测分析 26
    42 病原学分析 27
    43 遗传进化分析 28
    44 抗原性分析 29
    45 耐药性分析 30
    5 结 30
    参考文献 32
    综述 35
    致谢 43
    作者简介 44



    插图附表清单

    1 图1 2016年蒙古治区ILI时间分布复合图 14
    2 图2 2017年蒙古治区ILI时间分布复合图 14
    3 图3 2018年蒙古治区ILI时间分布复合图 15
    4 图1 新甲型H1N1流感病毒HA基系统进化树图 22
    5 图2 新甲型H1N1流感病毒NA基系统进化树图 25
    6 图3 季节性H3N2流感病毒HA基系统进化树图 26
    7 图4 季节性H3N2流感病毒NA基系统进化树图 26


    8 表1 蒙古治区20162018年年度ILI表 13
    9 表2 蒙古治区20162018年ILI年龄构成表 15
    10 表3 蒙古治区20162018年ILI年区分布表 17
    11 表4 蒙古治区20162018年流感病毒阳性样构成表 17
    12 表5 蒙古治区20162018年ILI样性阳性率较表 18
    13 表6 蒙古治区20162018年ILI样区阳性率较表 19
    14 表7 流感病毒抗原分析表 20
    15 表8 新甲型H1N1源性分析表 20
    16 表9 季节性H3N2源性分析表 21









    目 通蒙古治区19家哨点医院采集20162018年度流感样病例流行病学特征病原学情况流感病毒耐药性进行分析出次研究蒙古治区流行性感流行病学特征病原学特点预防控制蒙古治区流感流行提供定科学防控方 法 1收集蒙古治区20162018年度流感样病例(ILI)资料描述蒙古治区流感样病例季节区群ILI分布特征2采核酸检测方法2018年度蒙古治区19家哨点医院采集ILI病例咽拭子标进行流感病毒鉴定分型检测结果阳性标利MDCK细胞进行病毒分离培养采红细胞凝血抑制实验进行流感病毒分型鉴定3通GenBank网站载前国外流感病毒亚型流行参考毒株世界卫生组织推荐疫苗株DNA序列通NCBIblast程序进行流感病毒基序列分析流感病毒亲缘性关系DNAStar软件进行流感病毒基序列重新剪切连接采Mega70软件测序流感病毒毒株推介疫苗株国代表株进行系统树构建分析蒙古治区2018年度流感病毒基遗传进化特征神氨酸酶抑制剂药物耐药性 结 果 1流行病学监测结果:(1)2016年2018年蒙古治区19家哨点医院总报告235804例流感样病例(ILI)时期哨点医院门诊急诊总数1090297例流感样病例总门诊急诊诊中占百分(ILI%)233%全区15流感监测网络实验室中检测35981ILI样中4728阳性样阳性率1314%(2)流行性感时间分布趋势20162018年蒙古治区流行性感年度ILI时间分布情况样相2016年度ILI春季第513周较集中出现第流行高峰全年稳2017年度流行高峰出现年末第4952周2018年度出现两流行高峰分春季第1周冬季第52周(3)ILI群分布集中婴幼学龄前期童ILI分布前两年龄组分0岁组5岁组童低年龄组15岁组(4)ILI区分布理位置气候条件文俗等素影响中西部区流感样病例高东部区 2病原学监测结果:蒙古治区2016年2018年采集35981例ILI流感样病例咽拭子样中4728例阳性样4728例阳性率1314%年份阳性率差异统计学意义(χ260717P﹤005)性核酸检测阳性率差异统计学意义(
    χ22293P>005)流感病毒核酸检测阳性率高区域分布ILI区域分布基致中西部区高东部区年度流感病毒亚型流行毒株分布2016年度流行毒株乙型流感病毒2017年流行毒株季节性H3N2流感病毒新甲型H1N1流感病毒中季节性H3N2流感病毒流行强度较新甲型H1N1流感病毒流行强度加强2018年流行毒株乙型新甲型H1N1流感病毒 3遗传进化分析结果:研究测序2018年度10株新甲型H1N1流感病毒HA基结果显示测序毒株基序列区2009年分离株疫苗株AMichigan452015国家代表株ASichuan12009属分支亲缘性较高NA基属分支5株季节性H3N2流感病毒分离株疫苗株属分支2009年蒙古季节性H3N2分离株属分支4耐药性分析结果:蒙古2018年39株新甲型H1N1流感病毒6株季节性H3N2流感病毒耐药性进行检测结果表明39株新甲型H1N1流感病毒毒株中株HRI(检测药物敏感性降低)余38株均NI(检测药物敏感)6株季节性H3N2流感病毒均NI(检测药物敏感) 结 1蒙古治区20162018年度流感样病例发病具明显时间规律般冬春季节容易高发流行区分布说中西部区流感流行强度明显高东部区群分布情况流感样病例高发年龄组0~岁组5~岁组提示加强婴幼学龄前童流感预防控制工作220162018年度间种流感病毒亚型混杂起季节性H1N1流感病毒未检出外病毒亚型交成流行株3次研究中新甲型H1N1流感病毒分离株HANA基区2009年分离株位系统发育树分支中世卫组织新推荐流感疫苗株位系统发育树分支表明区2018年度新甲型H1N1流感病毒较前发生定变异加强流感监测预防发生流感流行季节性H3N2流感病毒HANA基未发生较变异4蒙古治区2018年度流感病毒神氨酸酶抑制剂药物呈现出高度敏感性仅株呈现检测药物敏感性降低未发生基变异需加强耐药检测

    关键词:流感(流行性感)流行病学病原学基耐药性


    Epidemiological and etiological studies of influenza in Inner Mongolia from 2016 to 2018
    Abstract
    Objective Based on the analysis of the epidemiological characteristics etiology and resistance of influenza virus in Inner Mongolia Autonomous Region in 20162018 it provides a scientific basis for prevention and control of influenza epidemic in Inner Mongolia Autonomous Region Method 1 Collect the 20162018 influenzalike illness (ILI) data of Inner Mongolia through the China Influenza Surveillance Information System and describe the distribution characteristics of ILI at different times different populations and different regions in Inner Mongolia 2 Influenza virus nucleic acid detection method was used to identify and type influenza virus throat swab specimens collected from 19 sentinel hospitals in Inner Mongolia Autonomous Region and MDCK cells were used for virus isolation for positive specimens 3 Download the sequences of influenza virus subtype reference strains and recommended vaccine strains through the GenBank website use DNAStar and Mega70 software to perform influenza virus sequence splicing and phylogenetic tree construction and analyze the genetic evolution characteristics and resistance of influenza virus genes Results 1 Epidemiological surveillance results From 2016 to 2018 19 sentinel hospitals in Inner Mongolia Autonomous Region reported a total of 235804 influenzalike cases (ILI) The total number of outpatient and emergency outpatient clinics during the same period was 1090297 The percentage of influenzalike cases (ILI) in total outpatient and emergency visits was 233 35981 ILI samples were tested in 15 influenza surveillance network laboratories of which 4728 were positive samples with a positive rate of 1314 The distribution of ILI in each year of Inner Mongolia Autonomous Region from 2016 to 2018 varies with time The first peak of ILI in each year appears between the first week to the 12th week in spring and the second peak occurs in the 46th week in winter Between the 52nd week The first two age groups of ILI are the 0yearold group and the 5yearold group while the lowest age group is the 15yearold group ILI distribution influenzalike cases in the Midwest are higher than in the East 2 Etiological monitoring results from 2016 to 2018 a total of 35981 throat swab samples of ILI cases were collected in Inner Mongolia of which 4728 were positive samples the positive rate was 1314 the positive rate difference in different years wa
    s statistically significant (χ2 60717 P ﹤ 005) There was no significant difference in the positive rate of nucleic acid detection between different genders (χ2 2293 P> 005) The distribution of regions with a high positive rate of nucleic acid detection is basically consistent with the distribution of ILI regions The distribution of major pandemic strains varies from year to year In 2016 the main epidemic strain was influenza B virus In 2017 the main epidemic strains were seasonal H3N2 influenza virus and neoA H1N1 influenza virus Among them the seasonal H3N2 influenza virus has a very strong epidemic intensity and the main strains in 2018 were type B and new A H1N1 influenza viruses 3 Genetic evolution analysis results HA genes of 10 new influenza A H1N1 influenza viruses sequenced in this study from 2016 to 2018 and 2009 isolates vaccine strains A Michigan 452015 country in this region The representative strain A Sichuan 12009 belongs to different branches but is more related the NA gene belongs to the same branch 5 seasonal H3N2 influenza virus isolates belong to the same branch as the vaccine strain but they are in line with the 2009 Inner Mongolia seasonal H3N2 Isolates belong to different branches 4 Results of drug resistance analysis The resistance of 39 new H1N1 influenza viruses and 6 seasonal H3N2 influenza viruses in Inner Mongolia in 2018 was tested and the results showed that among 39 new H1N1 influenza virus strains Only one strain is HRI (sensitivity to test drugs is greatly reduced) and the remaining 38 strains are NI (sensitivity to test drugs) Conclusions 1 The incidence of ILI in Inner Mongolia Autonomous Region in 20162018 has a clear time pattern and it is easy to be high in winter and spring the epidemic intensity of influenza in the central and western regions is higher than that in the eastern region Influenza prevention and control in infants and preschool children 2 In 20162018 various influenza virus subtypes were mixed Except for seasonal H1N1 viruses other virus subtypes have become epidemic strains 3 In this study the HA and NA genes of the new H1N1 influenza virus isolates were located in different branches of the phylogenetic tree from our 2009 isolates They are located on different branches of the phylogenetic tree from the newly recommended influenza vaccine strains of WHO which indicates that the new influenza A (H1N1) virus in our region in 2018 may be more mutated than before It is necessary to strengthen influenza surveillance to prevent the occurrence of influenza There was no significant variation in seasonal H3N2 4Inner Mongolia Autonomous Region's 2018 influenza virus showed high sensitivity to neuraminidase inhibitor drugs but resistance testing needs to be strengthened


    Key Words Influenza epidemiology etiology gene resistance

    Directed by Guo Wei Dong
    Applicant for Master degree Guo Yan Hui

    1 前言
    11 流行性感提出
    流行性感简称流感流感病毒引起急性呼吸道感染疾病流感种呼吸道传染病传播方式通飞沫传播正导致流感具极强传染性世界卫生组织列法定传染病首位流感首受全球性监测传染病[1]方面流感病毒基复杂存高度变性群通常容易感染该病毒导致重复感染高发病率世界范围造成广泛传播流行流感普通感总突然发生导致轻度重度疾病严重时甚导致死亡类社会造成定济负担回顾世界历史发生四次流感流行均类社会造成程度死亡负担巨财产济损失[24]流感床症状包括轻度呼吸道症状急性呼吸窘迫综合征器官衰竭甚死亡[5]般情况患流感通常会出现呼吸道卡性症状:咳嗽喉咙痛流鼻涕鼻塞发烧会出现肌肉酸痛流感具限性数患者周治愈高危群(婴老年)说流感容易导致发症容易引起严重疾病甚导致死亡[6]

    12 研究背景意义
    流感流行流感病毒变异造成结果流感病毒种RNA病毒具包膜呈负单链属正粘病毒科流感病毒属流感病毒基组分八分段RNA片段组成[7] 流感病毒根核蛋白(NP)基质蛋白(MP)特征分三类:甲型流感病毒(A)乙型流感病毒(B)丙型流感病毒(C)[8]甲型乙型流感病毒说包含8RNA流感病毒片段丙型流感病毒仅仅包含7RNA片段[9]目前甲型流感病毒乙型流感病毒世界流感流行毒株甲型流感病毒基易突变全世界流感流行通常甲型流感病毒引起流行亚型甲型H1季节性H3乙型流感病毒极易引起局部爆发亚型B型Victoria系B型Yamagata系流感病毒基容易定条件发生变异变异方式两种种通抗原漂移(Antigenic—drift)实现种抗原转换(Antigenic—shift)[10]
    流感活动具明显季节性区理位置气候条件流感活动周期[11]全球范围北半球国家(例美国国家)流感活动显示典型冬季高峰国言国幅员辽阔南北气候条件相气候条件复杂 流感活动季节性区异般言北部区流感流行季节发生冬季春季南部省份城市全年会发生流感病例[12]方面国流感活动存定周期性流行规律区[13]国流感新亚型整体呈现先南方出现然逐渐北趋势[13]国流感高危群 05岁群表明童青少年患流感风险高防控重点群[14]
    种具高度传染性容易导致严重果疾病说疾病预防控制传染病监测发挥着代作[14]世界卫生组织(World Health OrganizationWHO)更做流感预防控制工作1952年成立全球流感监测网络(The Global Influenza Surveillance Network)率先开创传染病全球性步监测先例[15]前113国家拥全球流感监测网络进步扩全球流感监测应系统[16]流感监测系统中四基世卫组织实验室分位美国日英国澳利亚[15]世界卫生组织流感合作中心通国家流感监测中心收集世界流感信息流行毒株作进步总结分析根分析结果制定全球流感预防控制政策保护民众生命健康安全[15]种研究已显示流感病例监测数效反映流感病毒活动变化模式[1617]流感监测仅解流感流行趋势时预测流行趋势时发现流感病毒新变种流感流行早期预警预测提供预防流感爆发重手段目前中国已建立较完善流感监测网络覆盖全国31城市中国流感监测技术提供强台[18]2009年加入国家流感监测技术台蒙古治区直断发展目前区19家流感监测哨点医院15家流感网络实验室
    次研究目解蒙古2016年2018年流感样病例流行病学特征流感病毒基病原学特点掌握区流感流行规律流感病毒变异规律解流感病毒遗传进化关系进步评估流感流行株群中发生暴发流行提供疫情预防控制指导时指导疫苗接种工作

    2 材料方法
    21 流感样病例流行病学监测
    211 监测象
    流感样病例(InfluenzaLike IllnessILI):指具发热(体温≥38℃)伴咳嗽咽痛症状缺乏实验室确定诊断病例
    212 资料源
    20162018年蒙古治区流感样病例监测数源中国疾病预防控制信息系统子系统中国流感监测信息系统覆盖全区12盟市包括19家哨点医院15家流感网络实验室报数
    213 统计分析方法
    描述蒙古治区时期区群中ILI分布运Office Excel2010进行数收集汇总SPSS软件进行统计分析P<005通NCBI网站Blast较验证获基序列MEGA60软件绘制基进化树分析遗传进化特征菌株进行分析WHO推荐疫苗毒株进行较分析遗传特征例遗传抗原性耐药性

    22 实验室检测
    221 核酸检测
    2211 试剂设备
    OneStep RTPCR试剂盒分子级菌水正反引物探针阳性RNA离心机Vortex仪Realtime PCR仪
    2212 核酸检测步骤
    1 引物融化振荡离心放置低温装置
    2RTPCR Enzyme Mix放置低温装置融化5×RTPCR Buffer颠倒混匀短暂离心5×RTPCR Buffer放置低温装置
    组分配制反应体系:
    组 分
    体 积(μL)
    5×RTPCR Buffer
    5×n
    10mM dNTP Mixture
    1×n
    RTPCR Enzyme Mix
    1×n

    RNase Inhibitor
    01×n
    游引物
    05×n
    游引物
    05×n
    RNase Free Water
    119×n
    Total
    20×n
    3反应液混匀分装20μL做标记
    4分装PCR分加入模板先加阴性加标加阳性5μL
    5备反应混匀短暂离心放入PCR仪进行RTPCR扩增反应程序见表:
    温度
    时间(分钟:秒)
    循环数
    60°
    10:00
    1
    42°
    10:00
    1
    50°
    30:00
    1
    95°
    15:00
    1
    94°
    00:30
    40
    50°
    00:30
    72°
    01:00
    72°
    10:00
    1

    µ


    222 MDCK细胞培养
    2221 试剂设备
    试剂:1生长成片MDCK细胞 2T75细胞培养瓶颈口倾角3DMEM培养基(高糖含L谷氨酰胺)4青链霉素母液(Gibco CatNo 15140144)(
    10000UmL青霉素G10000µgmL硫酸链霉素)分装保存20℃5HEPES缓液(Gibco CatNo 10010025)1M母液(Gibco CatNo 15630120)6胎牛血清(Excell CatNo FND700)7EDTA胰酶(005%胰酶053mMEDTA·4Na)(GibcoCat No 25300062)分装保存20℃8牛血清白蛋白组分V75%溶液(GibcoCat No 15260)91mL10mL菌移液等70%~75%酒精
    仪器:1Thermo CO2培养箱2OLYMPUS IX51倒置显微镜3Eppendorf移液枪微量移液器4BSL2生物安全柜等
    2222 步骤
    1 细胞已生长成切片细胞培养瓶中弃培养基加入5 mL预热EDTA胰蛋白酶
    2 轻轻摇动细胞瓶1分钟EDTA胰蛋白酶均匀分布整细胞薄层中然移液吸EDTA胰酶
    3 重新加入5mL37℃预热EDTA胰酶重复述步骤
    4 加入1mLEDTA胰蛋白酶均匀分布整细胞薄层中37℃孵育细胞瓶直细胞细胞瓶塑料表面分离(约5min〜10min)必时摇动吹分离细胞
    5 加入9mL细胞生长溶液轻轻移动移液器吹散细胞团然培养瓶底部吹端确保底部吹底部轻柔运动免产生泡沫
    6 移液90 mL细胞生长溶液(细胞悬液浓度约毫升105细胞)添加瓶中培养液终浓度10%胎牛血清6 mL(6 x 105 mL细胞)细胞悬液添加T25细胞培养瓶中剩余细胞悬液添加T75细胞瓶中作细胞传代种子 通常情况6mL细胞悬液23天成长80%〜90%单层细胞
    7 37°C 5%CO2培养箱中培养细胞天观察细胞状态

    223 流感病毒分离
    2231 材料
    1 试剂:175~90%成片MDCK细胞T25细胞瓶2TPCK处理胰酶(牛胰腺源Ⅷ型)(SigmaT8802)3HEPES缓液1M母液4DMEM培养基(高糖含L谷氨酰胺)5青链霉素母液(10000UmL青霉素G10000µgmL硫酸链霉素)6牛血清白蛋白组分Ⅴ75溶液(北京友康75BSAV)
    7PH74PBS缓液8处理床标05~1mL91mL10mL菌移液等
    2 培养基:1500mLDMEM液中加入:1)青链霉素母液5mL(终浓度达:100UmL青霉素100µgmL链霉素)2)牛血清白蛋白组分V 125mL(终浓度:025%)3)HEPES缓液125mL(终浓度:25mM)3)75NaHCO3溶液(加NaHCO3溶液体积总体积23)2病毒生长液:述培养液中500mL加入05mL(1‰)TPCK胰酶(母液浓度2mgmL)TPCK胰酶终浓度2µgmL
    2232 步骤
    1 75~90%成片细胞准备:(1)40倍光学显微镜观察细胞生长数生长阶段选择MDCK细胞进行病毒隔离(2)轻轻倒出细胞生长溶液10 mL菌移液器6 mL PBS缓液洗涤细胞3次
    2 接种细胞培养瓶:(1)菌移液细胞培养瓶中移出洗涤细胞PBS缓液(2)菌移液05〜1mL床样品吸移细胞培养瓶中轻轻摇动次均匀铺细胞培养瓶底部(3)步骤(2)中培养瓶放入35℃5%CO 2培养箱中12时瓶中10mL菌移液吸移6mL PBS缓液洗涤细胞细胞培养瓶中加入终浓度2μg mL TPCK胰蛋白酶5mL病毒生长液 腔室培养日观察细胞病变情况(细胞病变特征细胞肿胀变圆细胞间隙增加成网状结构细胞核缩破裂严重时细胞脱落
    3 细胞培养物收获:(1)75%~100%细胞出现病变时进行收获细胞病变应该第7天收获(2)进行红细胞凝集试验(HA)通HI方法鉴定流感病毒接种阴性样需传播次HA <8细胞分离株稀释101103然重新感染细胞继续细胞传代直HA≥8通HI方法进行病毒处理连续传代2次HA<8者核酸检测方法鉴定分型

    224 红细胞凝集红细胞凝集抑制试验
    2241 仪器试剂
    1 试剂:(1)标准参抗原:国际疫苗株国流行株作标准参抗原新分离株作试验抗原(2)标准参考抗血清:国际疫苗株国流行株制备抗血清标准参考血清血清RDE进行处理
    2 仪器:(1)水浴箱(37℃56℃)(2)台式离心机道调加样器单道调加样器(3)离心(4)96孔微量血凝板(豚鼠红细胞进行实验须U底板火鸡红细胞进行实验V底板)(5)200µL1000µLTIP头水槽(6)BSL2生物安全柜等
    2242 红细胞配置
    1 AS解决方案称Alsever解决方案制备方法:葡萄糖205g柠檬酸钠08g柠檬酸0055g氯化钠042g离子水100ml稍加加热溶解pH调618磅高压釜灭菌20min
    2 离心含红细胞AS溶液5分钟(火鸡鸡红细胞1800 rpm O型豚鼠红细胞2000 rpm离心机速度略)弃清液
    3 加入相量PBS缓液进行洗涤混合均匀离心5分钟(述速度相)弃清液PBS缓液洗涤3次次洗涤离心10分钟(述相速度)弃清液
    4 吸出适量红细胞PBS缓液配制1%工作浓度红细胞悬液
    2243 流感毒株HA滴度测定
    1 微量血凝板第2~12列加入50ul PBS(PH74)
    2 第列孔中加入100ul病毒悬液
    3 H1加入100ul PBS作红细胞阴性
    4 第列行枪孔中抽出50ul病毒溶液112列进行2倍系列稀释 丢弃列中50ul
    5 孔中添加50ul红细胞悬液轻拍混合均匀室温孵育1时
    6 HA试验结果判断:红细胞全部凝集+记录部分红细胞凝集记录+凝集记录出现完全凝集高稀释度倒数病毒血凝滴度
    2244 红细胞凝集抑制试验(HI)
    1 血凝板孔加入25ul PBS然A1—A5A7—A11列分加入:抗季节性A(H1N1)流感病毒标准参考血清抗季节性A(H3N2)流感病毒标准参考血清抗BYamagata系流感病毒标准参考血清抗BVictoria系流感病毒标准参考血清抗新甲型H1N1流感病毒标准参考血清25ulA6A12加入25ul PBS作阴性排枪第行孔吸取25ul液体第行第八行做2倍稀释血清行孔弃25ul
    2 A1A5列孔加入25ul检抗原(4血凝单位)阳性:A7A11
    列分加入4血凝单位季节性A(H1N1)流感病毒标准参考抗原季节性A(H3N2)流感病毒标准参考抗原BYamagata系流感病毒标准参考抗原BVictoria系流感病毒标准参考抗原新甲型H1N1流感病毒标准参考抗原25ul孔孔A6A12列加入25ul PBS孔轻拍混匀室温孵育30min
    3 孔中添加50ul红细胞悬液轻轻拍混合室温孵育3060分钟观察结果完全抑制血凝形成时血凝抑制滴度血清高稀释度倒数[19]

    23 基测序
    选择年份区亚型流感病毒株进行测序 测序专业技术公司完成

    24 流感病毒耐药性检测
    选择少30株抗原性分析流感病毒株进行耐药性测试表型方法监测流感病毒耐药性指导抗流感病毒药物提供具体检测容中国疾病预防控制中心负责完成

    3 结果
    31 流行病学监测结果
    311 总体概况
    20162018年蒙古治区19家哨点医院报告235804例流感样病例(ILI)期门诊急诊门诊总数1090297流感病例总门诊急诊诊中占百分(ILI%)233%年度ILI差异统计学意义(χ2591151P﹤005)15流感监测网络实验室中检测35981ILI样中4728阳性样阳性率1314%(见表1)

    表1 20162018年度蒙古治区年度ILI(样阳性率)
    Tab1 Inner Mongolia Autonomous Region 20162018 ILI(sample positive rate)
    年份 流感样病例 门急诊病例 ILI例 采集 阳性 阳性率
    总数 诊总数 () 样数 样数 ()
    2016 68665 3169259 217 12142 1683 1386

    2017 80877 3364872 240 11988 1720 1435
    2018 86262 3556166 243 11851 1325 1118
    合计 235804 10090297 233 35981 4728 1314

    312 时间分布
    蒙古治区20162018年年度ILI时间分布情况2016年第6周第12周出现明显高峰峰值4122016年ILI流行时间集中第513周流行趋势趋缓2017年第4952周出现明显流行高峰峰值5492017年ILI开始处缓低流行态势年终呈现突起态势2018年流感样病例(ILI)86262例ILI均值243周单位ILI波动范围173536间年度出现两流感高峰分第1周(444)第52周(536)低第33周数值173








    图1 2016年蒙古治区ILI时间分布复合图








    图2 2017年蒙古治区ILI时间分布复合图








    图3 2018年蒙古治区ILI时间分布复合图

    313 群分布
    蒙古治区20162018年度ILI构成居前两位0~岁组5~岁组两组合计占均达年度总ILI数80居第三位第四位分25~岁组60~岁组构成排位年龄组均15~岁组(见表2)

    表2 蒙古治区20162018年ILI年龄构成
    Tab2 Inner Mongolia Autonomous Region ILI age composition 20162018
    年龄组
    (岁)
    2016年

    2017年

    2018年

    合计
    ILL 构成
    例数 ()

    ILI 构成
    例数 ()

    ILI 构成
    例数 ()

    ILI 构成
    例数 ()
    0~
    41378 6026

    48797 6026

    51332 6033

    141507 6000
    5~
    16621 2421

    19205 2421

    20178 2375

    56004 2372
    15~
    1713 249

    2613 249

    2897 323

    7223 307
    25~
    6188 901

    7603 901

    9169 940

    22960 974
    60~
    2768 403

    2659 403

    2686 329

    8113 344
    合计
    68665 10000

    80877 10000

    86262 10000

    235807 10000

    314 区分布
    蒙古区幅员辽阔分东中西三区20162018年东部区ILI173中部区ILI323西部区ILI230 三区ILI差异统计学意义(χ215839625Ρ<005)(见表3)
    32 病原学监测
    321 总体情况
    2016年2018年蒙古治区19家哨点医院采集35981例ILI病例咽拭子样中阳性样4728例阳性率1314%年份阳性率统计学差异(χ2 60717P 005)2016年2017年阳性率显着高2018年阳性样型包括乙型(1825份3860)季节性H3N2(1424份3012)新甲型H1N1(1460份3088)混合型(19份040)中混合型2017年2018年较低检出率出现季节性H1N1年度均未检出(见表4)
    322 优势株变化
    蒙古治区20162018年年优势株分布相2016年毒株乙型流感病毒2017年毒株季节性H3N2新甲型H1N1流感病毒中季节性H3N2流感病毒流行强度较强2018年毒株乙型新甲型H1N1流感病毒
    323 性分布
    蒙古治区20162018年监测采集ILI样男女性113:1(男性5308女性4692)性核酸检测阳性率差异统计学意义(χ22293P>005)(见表5)
    324 区分布
    东部区总检测11178样中1003样阳性阳性率900%中部区检测12636例阳性1485例阳性率1175%西部区检测12167例阳性1664例阳性率1368%三区阳性率差异具统计学意义(χ2127114Ρ<005)(见表6)
    表3 蒙古治区20162018年ILI区分布
    Tab3 Regional distribution of ILI in Inner Mongolia Autonomous Region from 2016 to 2018


    2016年

    2017年

    2018年

    合计
    ILI
    病例数
    门诊
    诊数
    ILI率()

    ILI
    病例数
    门诊
    诊数
    ILI率()

    ILI
    病例数
    门诊
    诊数
    ILI率()

    ILI
    病例数
    门诊
    诊数
    ILI率()
    东部
    13801
    1119674
    123

    20388
    1191416
    171

    31839
    1500068
    212

    66028
    3811158
    173
    中部
    26174
    700574
    374

    34808
    864697
    402

    27076
    1152596
    235

    88058
    2717867
    323
    西部
    28690
    1349011
    213

    25681
    1308759
    200

    27347
    903502
    303

    81718
    3561272
    230
    合计
    3169259
    68665
    217

    80877
    3364872
    240

    86262
    3556166
    243

    235804
    10090306
    234
    表4 蒙古治区20162018年流感病毒阳性样构成[份()]
    Tab4 Composition of influenza virus positive samples in Inner Mongolia Autonomous Region in 20162018 [parts ()]
    年份
    检测
    样数
    阳性样型
    阳性率
    乙型 季H3N2 新甲H1N1 混合型 合计
    ()
    2016
    12142
    923(5484) 539(3203) 221(1313) 0(000) 1683(10000)
    1386
    2017
    11988
    326(1895) 730(4244) 657(38200)7(041)1720(10000)
    1435
    2018
    11851
    576(4347) 155(1170) 582(4392) 12(090)1325(10000)
    1118
    合计
    35981
    1825(3860)1424(3012)1460(3088)19(040)4728(10000)
    1314






    表5 蒙古20162018年ILI样性阳性率较
    Tab5 Comparison of positive sex ratios of ILI samples in Inner Mongolia from 2016 to 2018


    2016年

    2017年

    2018年

    合计
    检测
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    检测
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    检测
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    检测
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    6444
    867
    1345

    6320
    867
    1372

    6334
    424
    700

    19098
    2158
    1130

    5698
    816
    1432

    5668
    853
    1505

    5517
    325
    600

    16883
    1994
    1181
    合计
    12142
    1683
    1386

    11988
    1720
    1435

    11851
    749
    632

    35981
    4152
    1154






    表6 蒙古20162018年ILI样区阳性率较
    Tab6 Comparison of positive rates of ILI samples in different regions of Inner Mongolia from 2016 to 2018


    2016年

    2017年

    2018年

    合计
    采集
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    采集
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    采集
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()

    采集
    样数
    阳性
    样数
    阳性率()
    东部
    3479
    330
    950

    3566
    440
    1234

    4133
    233
    564

    11178
    1003
    900
    中部
    4736
    802
    1693

    4202
    498
    1185

    3698
    185
    500

    12636
    1485
    1175
    西部
    3927
    551
    1403

    4220
    782
    1853

    4020
    331
    823

    12167
    1664
    1368
    合计
    12142
    1683
    1386

    11988
    1720
    1435

    11851
    749
    632

    35981
    4152
    1154





    33 抗原分析
    2018年132株H1N1(pdm)流感病毒进行抗原性分析中128株AMichigan452015(H1pdm)类似株4株AMichigan452015(H1pdm)低反应株6株A(H3N2) 流感病毒进行抗原性分析中5株ASingaporeINFIMH1600192016(H3N2)类似株1株ASingaporeINFIMH1600192016(H3N2)低反应株(见表7)
    表7 流感病毒抗原分析
    Tab7 Influenza virus antigen analysis
    流感病毒
    抗原分析
    合计(株)
    类似株 低反应株
    新甲型H1N1 128 4 132
    季节性H3N2 5 1 6

    34 流感病毒全基源性分析
    341 新甲型H1N1全基源性分析
    世界卫生组织推荐疫苗株A California 72009标准2018年蒙古治区5种新甲型H1N1流感病毒毒株全基组序列进行核苷酸源性分析结果表明毒株八基片段疫苗株核苷酸源性997%999%(见表8)
    表8 新甲型H1N1源性分析
    Tab8 New type A H1N1 homology analysis
    流感毒株
    ACalifornia72009 ( Identities )
    PB2
    PB1
    PA
    HA
    NP
    NA
    M
    NS
    A蒙古科尔沁SWL18832018(H1)
    999
    999
    999
    997
    997
    997 992
    994
    A蒙古阿拉善左旗SWL15752018(H1)
    996
    997
    998
    987
    993
    997
    995
    992
    A蒙古回民SWL1182019(H1)
    997
    997
    996
    995
    993
    997
    994
    989

    A蒙古锡林郭勒SWL1852019(H1)
    995
    996
    990
    983
    996
    997
    992
    991
    A蒙古河SWL15822018(H1)
    999
    998 995
    994
    996
    997
    990
    991

    342 季节性H3N2全基源性分析
    WHO推荐A Victoria 742018(H1N1)疫苗株标准蒙古治区2018年5株季节性H3N2流感病毒毒株全基组序列进行核苷酸源性分析结果发现毒株8基节段疫苗株核苷酸源性977999间(见表9)
    表9 季节性H3N2源性分析
    Tab9 Seasonal H3N2 homology analysis
    流感毒株
    AVictoria742018(H3N2) ( Identities )
    PB2
    PB1
    PA
    HA
    NP
    NA
    M
    NS
    A蒙古海勃湾15732018(H3)
    997
    995
    995
    994
    994
    997 993
    998
    A蒙古海勃湾15862018(H3)
    996
    995
    995
    994
    993
    994
    995
    992
    A蒙古科尔沁18492018(H3)
    998
    997
    997
    996
    994
    997
    993
    997
    A蒙古海勃湾15912018(H3)
    997
    996
    996
    995
    995
    994
    994
    996
    A蒙古科尔沁18052018(H3)
    999
    998 998
    997
    997
    997
    996
    994

    343 流感病毒基序列进化树分析
    3431 新甲型H1N1流感病毒HA基进化树分析
    蒙古治区2018年10株新甲型H1N1流感病毒分离株HA基进行测序系统进化树构建流感病毒毒株HA病毒基测序位分支中ANeimenggudongheSWL14722018ANeimenggudongheSWL5142018属分支ANeimenggudongshengSWL16022018
    ANeimenggukeerqinSWL18832018属分支ANeimenggualashanzuoqiSWL15752018ANeimenggualashanzuoqiSWL15972018属分支ANeimengguxilingguleSWL1852019ANeimengguhaibowanSWL16172018ANeimengguhuimingSWL1182019ANeimenggulinheSWL15822018属分支结果时显示:分支分离株侧枝相说明分离株HA基换率较低方面新推荐疫苗株分离株属分支2009年蒙古疫苗株属分支次新甲型H1N1流感病毒分离株国国家代表株ASichuan12009属分支亲缘性较高(见图4)

    图4 新甲型H1N1流感病毒HA基系统进化树
    注 ▲分离毒株 ●疫苗株 ♦中国代表株分支处数字 Bootstrap检验信度标尺值 0005 代表单位长度核苷酸差异水
    3432 新甲型H1N1流感病毒NA基进化树分析
    蒙古治区2018年10株新甲型H1N1流感病毒分离株进行NA基测序构建系统进化树测序流感病毒毒株NA基均位分支中ANeimenggukeerqinSWL18832008ANeimenggudongshengSWL16022008属分支ANeimenggudongshengSWL14722008ANeimenggukeerqinSWL15142008属分支ANeimengguhuiminSWL1182008ANeimengguhaibowanSWL16172008ANeimenggulinheSWL15822008属分支ANeimenggualashanzuoqiSWL15752008ANeimenggualashanzuoqiSWL15972008属分支ANeimengguxilinguolSWL1852008属分支结果时显示次分离毒株新推荐疫苗株AMichigan452015属分支国家推荐株然属分支亲缘性高(见图5)

    图5 新甲型H1N1流感病毒NA基系统进化树
    注 ▲分离毒株 ●疫苗株 ♦中国代表株分支处数字 Bootstrap检验信度标尺值 0005 代表单位长度核苷酸差异水
    3433 季节性H3N2流感病毒HA基进化树分析
    蒙古治区2018年5株季节型H3N2流感病毒分离株进行HA基测序构建系统进化树测序流感病毒毒株HA基均位分支中ANeimengguhaibowan15732018ANeimengguhaibowan15912018ANeimengguhaibowan15862018属分支ANeimenggukeerqin18052018ANeimenggukeerqin18492018属分支结果时显示:5株分离株疫苗株属分支蒙古2009年季节性H3N2毒株分属分支提示病毒较2009年存变异(见图6)


    图6 季节性H3N2流感病毒HA基系统进化树
    注 ▲分离毒株 ●疫苗株 ♦中国代表株分支处数字 Bootstrap检验信度标尺值 0002 代表单位长度核苷酸差异水
    3434 季节性H3N2 流感病毒NA基进化树分析
    蒙古治区2018年5株季节型H3N2流感病毒分离株进行NA基测序构建系统进化树测序流感病毒毒株NA基均位分支中ANeimengguhaibowan15732018ANeimengguhaibowan15912018ANeimengguhaibowan15862018属分支ANeimenggukeerqin18052018ANeimenggukeerqin18492018属分支结果时显示:
    5株分离株疫苗株属分支蒙古2009年季节性H3N2毒株分属分支提示病毒存变异(见图7)






    图7 季节性H3N2流感病毒NA基系统进化树
    注 ▲分离毒株 ●疫苗株 ♦中国代表株分支处数字 Bootstrap检验信度标尺值 0005 代表单位长度核苷酸差异水

    35 流感病毒耐药性分析
    流感治疗目前疫苗接种抗病毒治疗两种方法两种抗病毒治疗药物种类型烷胺类药物M2离子通道抑制剂包括金刚烷胺金刚乙胺药物仅影响甲型流感病毒乙型丙型流感病毒效 种神氨酸酶(NA)抑制剂例奥司韦2018年蒙古39株新甲型H1N1流感病毒6株季节性H3N2流感病毒进行耐药性测试结果表明39株新甲型H1N1流感病毒毒株中株HRI(测试药物敏感性降低) 余38株NI(测试药物敏感)6种季节性H3N2流感病毒株均NI(测试药物敏感)(见表10)


    表10 流感病毒耐药性分析
    Tab9 Analysis of influenza virus resistance
    流感病毒
    耐药检测
    合计(株)
    NI HRI
    新甲型H1N1 38 1 39
    季节性H3N2 6 0 6

    4 讨
    41 流行病学监测分析
    411 时间分布
    根ILI年度监测结果蒙古治区20162018年流感病毒时间监测显示20162018年ILI%种情况表明年份流感流行特征流行时间趋势明显[20]流行性感流行强度时间密切相关20162018年ILI监测结果显示流感流行第高峰发生113周间第二高峰出现冬季第46周~第52周间结果国北方区例北京流感容易冬春季节高发夏秋季节发生频率较低流行时间特征相中国南方(例浙江)两冬春季节春夏秋季节流行季节规律略[21]外20162017年春季出现次高峰冬季保持稳流行趋势2018年春季冬季两高峰 原全球气候变化关根学者研究外部环境周均气压风速温度累积日时间减少时患流感风险会增加相湿度增加时流感发病风险会升高发现进步表明区理位置气候条件影响北部南部流感流行素[22]
    412 区分布
    20162018年度蒙古治区ILI监测结果区进行分析蒙古中西部区ILI较高分析原蒙古治区处国北部幅员辽阔势呈东西狭长型东西跨度较气候差异十分明显东部区温度低湿度高西部区温度高风速高湿度低气候差异导致结果原外区种风俗惯诊差异存流感监测工作位情况根蒙古治区年开展区流感监测督导工作盟市区流感监测数报质量存参差齐情况造成区ILI数ILI差异较明显重原结果提示区加强流感监测工作流感监测数够更加准确时流感监测全群监测设立哨点医院进行监测流感区分布哨点医院数量城市口数关
    413 群分布
    蒙古治区20162018年度ILI监测结果进行分析结果显示男女性间ILI差异具统计学意义流感全群普遍易感年龄构成情况0~岁组5~岁组流感高发群学者万永虎[23]温雯[24]孙佰红[25]研究结果致分析现象原该年龄段群处幼学龄前期身抵抗力较弱历流感次数较少累积群免疫率较低方面该群常活动幼托等群较密集场流感群间互相传播提供定利条件
    建议应更加重视05岁童流感样病例监测工作时应该加强该群流感疫苗接种促进流感预防控制时应该预防该群家庭成员感染流感病毒时推广流感疫苗知识减少该群中流感爆发数量减少该年龄段流感样病例数降低出现规模流感疫情风险外然60~岁组群次结果高发群该年龄组均免疫力低老年发生流感容易引起系统疾病严重者甚危生命应该加强该群流感监测工作进步提高该群流高关注度减少流感发生降低生命财产损失

    42 病原学分析
    流感引起床症状相似仅仅床表现难判定流感病毒型流感病毒鉴定分型显十分必核酸检测方法实现流感诊断流感病毒鉴定分型[2627]通20162018年度蒙古治区流感病毒进行核酸检测检测结果显示2018年阳性率明显低20162017年分析原群免疫力提高疫苗接种阳性率降低根前蒙古相关研究知2013年蒙古区季节性H1N1检出[28]20162018年度蒙古治区季节性H1N1检出进步分析原环境气候变化物种选择群免疫力提高流感病毒影响流感病毒基变异等相关素关具体原进步研究蒙古治区2016年2018年年优势毒株分布略2016年流行毒株乙型流感病毒2017年流行毒株季节性H3N2流感病毒新甲型H1N1流感病毒中季节性H3N2流感病毒具强流行强度2018年流行毒株乙型流感病毒新甲型H1N1流感病毒数出蒙古治区20162018年流感病毒变化趋势呈相互交变化学者流感病毒流行季节亚型交成流行株报告相[2930]外混合型2017年2018年较低检出率出现进步实验验证结果混合型分析原方面病毒存变异两种流感病毒时感染宿导致流感病毒基体间交叉互换形成结果方面实验室员实验程中没严格遵守样品采集实验章程采集运输标程中出现交叉感染导致结果
    蒙古治区流感病毒阳性检测率男女性间差异统计学意义Miyuki Kawado[31]等研究结果致说明流感病毒全群说普遍易感没性间差异蒙古治区盟市流感病毒阳性率差异具统计学意义分布情况区ILI分布情况致阳性率较高区基集中中西部区结果进步说明流感发生理位置气候环境等素关

    43 遗传进化分析
    流感病毒属正粘病毒科根核蛋白(NP)膜蛋白(M)抗原特性相关基特性流感病毒分甲型(A型)乙型(B型)丙型(C型)三型[32]甲型乙型流感病毒均含8RNA片段[32]片段编码12蛋白中甲型流感病毒根表面血凝素(HA)神氨酸酶(NA)分许亚型血凝素(HA)现已知18类型神氨酸酶(NA)11类型[33]HANA相互组合形成许亚型流感病毒现象决定宿感染流感病毒流感病毒传染性相[34]
    流感流行原血凝素(HA)神氨酸酶(NA)断变异变异形式两种:抗原漂移抗原转换[35]HA说容易发生点突变点突变导致氨基酸变化积累定程度时候会导致抗原位点改变时改变流感病毒宿机体特异性容易引起中型流感流行[36]NA说发生抗原转换流感病毒基间片段互相发生重配产生新亚型容易引起流感流行[37]
    次20162018年度蒙古治区新甲型H1N1流感病毒HA基测序结果进行基进化树分析结果显示次研究分离株区2009年新甲型H1N1流感疫苗株AMichigan452015国家代表株ASichuan12009分属分支存定差异结果说明蒙古治区年新甲型H1N1流感病毒HA基较2009年已发生定基变异产生新分支新甲型H1N1流感病毒NA基分析结果HA分析结果区2009年分离株疫苗株国家代表株属分支亲缘性较低说明WHO新推荐疫苗株区年新甲型H1N1流感病毒没较保护性
    次研究季节性H3N2流感病毒HA遗传进化分析结果显示5株季节性H3N2流感病毒毒株疫苗株ANew YorkPV015362018属分支说明该疫苗株区季节性H3N2流感病毒具保护作疫苗接种预防流感效措施区2009年分离株分属分支说明蒙古治区年季节性H3N2病毒HA基较2009年已发生定基变异产生新分支提示加强季节性H3N2流感病毒监测工作
    次研究季节性H3N2流感病毒NA遗传进化分析结果HA分析结果相分离流感病毒毒株疫苗株ANew YorkPV015362018属分支说明该疫苗株蒙古治区季节性H3N2流感病毒具保护作区2009年分离株分属分支时说明蒙古治区年季节性H3N2病毒NA基较2009年已发生定基变异产生新分支
    全球监测显示推荐疫苗株型流感流行系谱间正确匹配概率仅50[6]时研究表明疫苗株流行株匹配时流感病毒谱系感染机体提供交叉保护作限[11]床研究表明数群说四价流感疫苗具较免疫保护效果[14]目前全球许国家区然三价流感疫苗[13]尚通流感疫苗情况四价流感疫苗成全球流感疫苗发展必然趋势 中国应促进四价流感疫苗民特高危群提供效保护

    44 流感病毒抗原性分析
    流感病毒8节段中分编码着蛋白中第4节段第8节段分编码血凝素蛋白神氨酸酶两种蛋白构成流感病毒抗原性成分流感病毒HA蛋白部含4抗原决定簇包括:Sa(124125153157159164)Sb(184195)Ca(137142166170203205221222235237)Cb(7075)[36]研究表明果抗原决定簇中4位点发生突变位点分布抗原决定簇表明新抗原突变株会出现[37]2018年132株新甲型H1N1流感病毒进行抗原性分析中128株AMichigan452015(H1pdm)类似株4株AMichigan452015(H1pdm)低反应株6株季节性H3N2流感病毒进行抗原性分析中5株ASingaporeINFIMH1600192016(H3N2)类似株1株ASingaporeINFIMH1600192016(H3N2)低反应株低反应株存较话会抗原变异幅度增会发生抗原性转变形成新亚型时果群普遍缺乏免疫力会引起较流行甚世界性流行次研究低反应株较少说明蒙古治区年流感病毒抗原性未发生较变异会导致流感流行流感病毒基具高度变异性流感监测工作必须时开展做万失

    45 流感病毒耐药性分析
    流感病毒基变异性高亚型间容易发生交叉互换难预测进化趋势导致流感疫苗群效保护时间短流感疫苗覆盖流感病毒型[3839]流感治疗说抗病毒药物治疗显尤重目前抗流感病毒治疗药物两种:类烷胺类药物M2离子通道通道抑制剂包括金刚烷胺金刚乙胺该类药物仅作甲型流感病毒乙型流感病毒丙型流感病毒效类神氨酸酶(NA)抑制剂奥司韦扎米韦[4042]蒙古治区2018年流感病毒耐药性监测分析显示数流感病毒神氨酸酶抑制剂表现出高度敏感性株流感病毒检测药物敏感性显着降低分离流感病毒毒株NA蛋白催化位点辅助位点角度
    没发现氨基酸取代该结果表明通基分析NA基片段保持高度源性流感神氨酸酶抑制剂药物敏感[43]分析原区流感疫苗接种工作做较位群预防流感意识普遍提高面积群服抗流感病毒药物然需加强流感病毒耐药性监测次研究奥司韦等神氨酸酶抑制剂药物预防治疗新甲型H1N1流感病毒季节性H3N2流感病毒中发生耐药现象明确流感病毒产生耐药机制指导区医疗卫生系统合理规范抗流感病毒药物方面指导新甲型H1N1流感流行具重意义[44]

    5 结
    120162018年度蒙古治区流感流行呈现冬春季流行趋势理位置气候条件中部西部区较东部容易发生流感群说婴幼学龄前期童流感高发群提示做该群流感监测疫苗接种工作
    2 20162018年蒙古治区混合流行流感病毒亚型未检测季节性H1N1病毒外病毒亚型交成流行株
    3 次研究中新甲型H1N1流感病毒分离株HA基区2009年分离株位系统发育树分支中HA基位分支中WHO新推荐流感疫苗株属系统进化树分支提示区新甲型H1N1流感病毒存变异新推荐流感疫苗区新甲型H1N1流感流行没较保护作季节性H3N2流感病毒分离株疫苗株位分支提示区流感流行具较保护作
    4蒙古治区2018年度流感病毒神氨酸酶抑制剂药物呈现出高度敏感性需加强耐药检测



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    综述
    流行性感研究进展
    1 流行病学研究
    流行性感简称流感种会引起猪禽类等动物发生呼吸道感染
    急性传染病潜伏期较短通呼吸道飞沫传播流感病毒属正粘病
    毒科流感病毒属包膜单股负链 RNA 病毒引起流感流行病原体类感染流感病毒出现畏寒高热头痛全身酸痛流涕干咳等中毒症状少数病伴呕吐腹泻等消化道症状[1]全球范围年会发生规模流行甚隔1015年会发生范围流感流行[2]年约10%20%口感染流感病毒[2]流感成中发病率约5%~lO%童高达20%~30%学校托幼机构养老院等群聚集场易发生聚集性疫情暴发[3]婴幼老慢性病感染流感病毒致住院甚死亡世界年流感导致危重病例约300万500万死亡约25万50万[5]研究表明流感明显增加婴幼少年童门诊医次数[4]次流感流行会造成程度超额死亡巨济损失[5]提示流感监测必性
    传染病监测疾病防控发挥着代作更做流感
    预防控制世界卫生组织(World Health OrganizationWHO)1952年成立
    全球流感监测网络(The Global Influenza Surveillance Network)开创传染病全球性步监测先例流感监测网络建立初覆盖全球80国家目前全球流感监测网络扩全球流感监测报告系统(The Global Influenza Surveillance and Response System)覆盖国家数已达113[6]监测系统中四WHO基础理实验室分位美国日英国澳利亚WHO流感合作中心通国家流感监测中心收集世界流感发病信息流行毒株汇总分析根分析结果制定全球流感防控政策[7]流感样病例监测资料已证实够效反映流感病毒活动变化规律中国1957年成立国家流感中心2009年世界卫生组织评第五WHO流感合作中心目前国已建成相较完整覆盖全国31省流感监测网络中国流感监测提供强力技术台[8]
    流感具传染性强传播速度快特点抗原突变频率高幅度
    类突变株普遍易感造成易群中广泛传播统计年约5成 20童遭受流感病毒侵袭约 25~50 万死流感相关疾 病[9]仅20世纪类历史发生四次流感流行包括 1918 年 H1N1 流感病毒引发西班牙流感1957年国贵州暴发 H2N2 流感病毒引起亚洲流感1968年H3N2流感病毒造成香港流感1977年重现国辽宁 H1N1 流感病毒引起俄罗斯流感[10]均类身体健康生命安全造成极危害类抗流感战役中做出巨努力法断绝流感流行暴发2009年甲流暴发次全球带巨灾难
    流感病毒快速变异难预期进化动态导致疫苗株新流行株失匹配出现抗病毒药敏感耐药株甚会出现严重致死性病例流感病毒成高发病率高病死率传染病原见流感防控类巨挑战20世纪次流感流行首发均中国[11]国成世界公认流感发发源中国南方世界流感流行中心假说尚明确原解释现象说明国流感动态受世界卫生组织全球国广泛关注预防流感发生传播佳方法接种流感疫苗然流感病毒具较高变异性流感疫苗群效保护时间较短年WHO根流感病毒流行情况预测年流感流行提供疫苗参考株制备相应新疫苗[12]
    流感活动具明显季节性[13]处北半球美国加欧洲等国家区流感活动具典型冬季高峰[14]国幅员辽阔气候条件复杂流感活动季节性域相总体讲北方省份流感发生冬春季南方省份流感四季病例发生发病高峰夏季冬季国流感活动存定周期性周期规律区流感长期变异表现抗原转变结果导致世界流行流感发病率男女间没差异流感样病例(ILI)年龄构成前三位均0~岁组5~岁组15~岁组(部分区第三位25~岁组)0~5岁组国流感样病例(ILI)高发群0~5岁组提示童青少年季节性流感高危群防控重点群[15]职业服务行业学生工发病率较高抵抗力较低慢性疾病老年感染病情加重甚导致死亡流感群分布特征受群免疫力水接触机会两素影响[16]

    2 流感病毒病原学研究
    根相高度保守核蛋白(NP)膜蛋白(M)抗原特性流感病毒分甲乙丙三型(ABC 三型)[17]甲乙型流感病毒均含8RNA节段丙型流感病毒含7RNA节段节段编码1~2蛋白常见类生命健康危害流感病毒甲型流感病毒引起具感染性畜禽患性疾病病毒颗粒呈形性数球状新分离丝状直径80~120nm甲型流感病毒整基组长度13588bp1~8节段RNA长度分2341bp2341bp2233bp1778bp1565bp1413bp1027bp890bp分编码PB2PB1PAHANPNAM1M2NS1NS210种蛋白前6种RNA节段编码种蛋白均流感病毒结构蛋白包括糖基化结构蛋白HANA4种非糖基化结构蛋白2种 RNA节段编码两种蛋白分M1M2 NS1NS2M蛋白基质蛋白NS非结构蛋白[18]甲型流感病毒部8基节段均核糖核蛋白复合(RNP)核衣壳形式存包含核蛋白(NP)三种聚合酶蛋白(PB2PB1PA)病毒RNA[19]RNP呈螺旋状称排列直径10nm构成病毒颗粒核心病毒颗粒中间层基质蛋白(M1蛋白)助病毒装配外层脂质双层包膜包膜血凝素(HA)神氨酸酶(NA)基质蛋白(M2)三种糖蛋白构成放射状突起[20]
    乙型流感病毒感染致病力低般引起局部流行危害性较丙型流感病毒感染象婴幼引起类较轻呼吸道症状少导致流行发生[21]根宿类型流感病毒分流感病毒猪流感病毒禽流感病毒马流感病毒等类型通常情况流感病毒具宿特异性基A型(甲型)流感病毒亚型感染鸟类宿H1H2H3亚型H5N1H7N2H7N3H7N7H9N2 等禽流感病毒偶尔感染持续间传播[22]亚型宿感染力差异较亚型毒株间感染力存定差异
    流感病毒表面两种具抗原性糖蛋白分血凝素(HA)神胺酸酶(NA)病毒表面糖蛋白HANA抗原性甲型流感病毒目前分 18H亚型11N亚型[23]HA种呈柱状三聚体结构糖蛋白识宿细胞表面糖受体唾液酸结合时诱导机体产生保护性抗体NA位病毒颗粒表面呈蘑菇状四聚体结构糖蛋白功防止子代病毒身凝聚促进成熟病毒粒子释放时目前抗流感病毒药物重作靶点
    [24]HANA组合构成亚型甲型流感病毒决定流感病毒宿传染性世界性流感流行流感病毒变异类免疫屏障相互抗衡结果HANA变异流感流行原群免疫压力常引起抗原漂移抗原转换前者指基发产生点突变导致氨基酸改变累积定程度时抗原决定簇发生改变产生新亚型属量变引起中型流感流行者基流感病毒节段基重组形成新亚型属质变引起世界流行[25]外2 2流感病毒感染宿细胞时发生基重构产生新病毒2009年3月墨西哥美国暴发甲流病毒禽流感病毒(PB2PA片段)流感病毒(PB1 片段)北美典猪流感病毒(HANPNS片段)欧亚猪流感病毒(NAM 片段)重配新型流感病毒继承猪禽类三种源流感病毒基片段毒力较亲猪流感病毒增强引起全球范围规模流行造成严重疾病负担济损失[26]
    流感病毒传染性强引发次群流感流行甲型流感病毒频繁抗原变异成罪魁祸首常见类生命健康危害流感病毒甲型流感病毒次乙型流感病毒丙型流感病毒较少引起流行[27]HA识宿细胞表面糖受体唾液酸结合病毒够吸附宿细胞表面时诱导机体产生保护性抗体NA功防止子代病毒身凝聚促进成熟病毒粒子释放HANA组合构成亚型甲型流感病毒决定流感病毒宿传染性[28]
    甲型流感病毒RNA突变率高含节段病毒复制程中
    基易重新排列导致流感病毒致病性抗原性发生相应变化世界性
    流感流行流感病毒变异类免疫屏障相互抗衡结果[29]
    甲流病毒2009年3月墨西哥首次发现年5月美国已出现642
    例甲流病例甲流迅速全世界蔓延[30]6月11日WHO宣布次甲流流行警告级提高高级6级标志着21世纪第次流感流行开始2009 年甲流全球历6年流行流行规律变异特征逐渐发生变化
    流感病毒HA水解成HA1HA2两独立肽链二者通二硫键相连 HA断裂成HA1HA2具感染性[31]亚型流感病毒HA蛋白裂解位点氨基酸序列裂解位点碱性氨基酸数量附糖基化位点缺失等改变
    HA蛋白宿细胞体蛋白水解酶敏感性流感病毒致病性发生改变般认HA裂解位点仅含单碱性氨基酸表现低致病性含少4碱性氨基酸表现高致病性特征果糖基化位点寡糖链含碱性氨基酸HA裂解位点遮掩住流感毒株旧表现低致病性复制程中暴露碱性氨基酸转变高致病性毒株[32]2009年3月2010年5月中国流行甲流毒株HANA序列ACalifornia072009(H1N1)疫苗株发现中国甲流毒株裂解位点中氨基酸序列V 338PSIQSR↓G型疫苗株I338PSIQSR↓G型338位点处中国甲流毒株氨基酸V疫苗株I致病性受影响表现低致病性

    3 流感病毒糖基化位点研究
    流感病毒通糖基化形成寡糖侧链稳定流感病毒三聚体结构功具重作般认糖基化位点改变数目增减会影响病毒抗原性病毒稳定性传染性致病性产生定影响病毒进化程中会产生新糖基化位点糖基化位点非病毒生存必需抗原位点酶催化位点掩盖抗体病毒颗粒识中作降低影响HA蛋白水解作阻碍蛋白酶HA蛋白水解成HA1HA2影响流感病毒致病性Matrosovich等研究认HA蛋白裂解位点处糖基化
    位点增加会阻碍流感病毒识结合宿细胞糖基化位点缺失会增强 HA宿细胞蛋白酶切割敏感性病毒致病性增强[33]

    4 耐药性研究
    目前床二类抗流感病毒药物类干扰病毒M2 蛋白功药物类病毒神氨酸酶(neuraminidase NA)抑制剂干扰病毒M2 蛋白功药物金刚烷胺金刚乙胺效预防治疗A 型流感病毒感染流行流感病毒逐渐类药物产生耐药M2蛋白第43位氨基酸发生突变金刚烷胺类药物法阻断离子通道作法抑制季节性流感病毒甲型H1N1 流感病毒复制目前已失床价值[34]
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    致 谢
    文导师郭卫东教授悉心指导完成年恩师硕士学位课程学专业实践活动学术报告写作等方面予极关怀支持研究生学生涯中受益颇恩师表示诚挚感谢崇高敬意
    感谢郭卫东老师篇文样表写作时予帮助感谢关心帮助支持










    作 者 简 介

    郭燕慧女汉族1993年10月出生蒙古乌兰察布市市2017年毕业蒙古科技学包头医学院预防医学专业获医学学士学位2017年开始攻读蒙古科技学包头医学院公卫生学院公卫生专业硕士学位

    攻读硕士学位期间发表文:
    1 郭燕慧郭卫东跃华蒙古2018年流行性感流行病学病原学研究[J]蒙古医学杂志201951(8)909911














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    文档贡献者

    王***朝

    贡献于2021-01-22

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