液体乳中三聚氰胺快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201907)
1 范围
方法规定液体乳中三聚氰胺胶体金免疫层析快速检测方法
方法适巴氏杀菌乳灭菌乳调制乳发酵乳中三聚氰胺快速测定
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中三聚氰胺胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条检测卡中检测线(T线)抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线(C线)颜色深浅较样品中三聚氰胺进行定性判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 甲醇
312 三羟甲基氨基甲烷(Tris)
313 1molL盐酸:移取83 mL浓盐酸加入900mL水中定容1 L
314 甲醇水溶液:准确量取50 mL甲醇50 mL水混匀备
315 稀释液:准确称取605 g Tris(312)85 g 1molL盐酸(313)加水定容1 L混匀备
32 参考物质
参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量见表1纯度≥99
表1 三聚氰胺参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
三聚氰胺
Melamine
108781
C3H6N6
12612
注:等溯源物质
33 标准溶液配制
三聚氰胺标准储备液(1000 μgmL):精密称取适量三聚氰胺标准品(32)置10 mL容量瓶中甲醇水溶液(314)溶解稀释刻度摇匀制成浓度1000 μgmL三聚氰胺标准储备液直接购三聚氰胺标准储备液4℃避光保存备效期3月
34 三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒
341 金标微孔(含胶体金标记特异性抗体)
342 试纸条检测卡
4 仪器设备
41 移液器:200 µL1000 µL5 mL
42 涡旋混合器
43 电子天:感量 001 g
44 环境条件:温度15℃~35℃湿度≤80
5 分析步骤
51 试样制备
取适量代表性样品充分混匀
52 试样提取
准确称取样品05 g离心中加入5 mL稀释液(315)涡旋混匀提取5 min测液
注:试样提取程试剂盒说明书做限定
53 测定步骤
531 试纸条金标微孔测定步骤
吸取150~200 μL样品测液金标微孔(341)中抽吸5~10次混合均匀气泡40℃温育3 min检测试纸条(342)样品端垂直插入金标微孔中40℃温育5 min微孔中取出试纸条进行结果判定
532 检测卡测定步骤
吸取150200 μL样品测液检测卡加样孔(342)中室温反应35 min进行结果判定
54 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
称取空白试样5253步骤样品法操作
542 加标质控试验
准确称取空白试样100 g(精确001 g)置100 mL玻璃溶液瓶中加入250 μL三聚氰胺标准溶液(1000 μgmL)(33)试样中三聚氰胺浓度25 mgkg5253步骤样品法操作
注:参考标准品说明书配置操作
6 结果判定求
通控制线(C线)检测线(T线)颜色深浅进行结果判定目视结果判读图1
61 效
控制线(C线)显色表明正确操作试纸条检测卡效
62 阳性结果
621 消线法
检测线(T线)显色控制线(C线)显色表明样品中三聚氰胺含量高方法检测限判定阳性(图1试纸条检测卡目视判定示意图 )
622 色法
检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色浅显色表明样品中三聚氰胺含量高方法检测限判定阳性(图1试纸条检测卡目视判定示意图 )
63 阴性结果
631 消线法
检测线(T线)控制线(C线)均显色表明样品中三聚氰胺含量低方法检测限判定阴性(图1试纸条检测卡目视判定示意图 )
632 色法
检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色深者检测线(T线)颜色控制线(C线)颜色相表明样品中三聚氰胺含量低方法检测限判定阴性(图1试纸条检测卡目视判定示意图 )
试纸条
手持端
C线
T线
样品端
检测卡
加样孔
T线
C线
C线
T线
T线
T线
C线
C线
阴性
阳性
阳性
阴性
消线法
色法
结果效
检测装置示意图
图1 试纸条检测卡目视判定示意图
64 质控试验求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
65 读数仪测定法
读数仪说明书求操作直接读取进行结果判定
7 结
三聚氰胺灭蝇胺交叉反应检测结果阳性时应三聚氰胺结果进行确证
8 性指标
81 检测限
25mgkg
82 灵敏度
灵敏度应≥99
83 特异性
特异性应≥85
84 假阴性率
假阴性率应≤1
85 假阳性率
假阳性率应≤15
注:性指标计算方法参见附录A
9
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定根试剂盒说明书进行操作方法者应验证满足方法规定项性指标试剂试剂盒
方法参标准食品安全国家标准原料乳乳制品中三聚氰胺检测方法(GBT 223882008)
方法试剂盒灭蝇胺存交叉反应结果判定阳性时应采实验室仪器方法食品安全国家标准原料乳乳制品中三聚氰胺检测方法(GBT 223882008)三聚氰胺结果进行确证
附录A
快速检测方法性指标计算表
表A1性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异(χ2)
χ2(|N12N21|1)2(N12+N21)度(df)1
灵敏度(p+)
p+N11N1
特异性(p)
pN22N2
假阴性率(pf)
pfN12N1100灵敏度
假阳性率(pf+)
pf+N21N2100特异性
相准确度c
(N11+N22)(N1+N2)
注:
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N:特定单元结果数第标指行第二标指列例:N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位:北京市食品安全监控风险评估中心(北京市食品检验)
验证单位:山东省食品药品检验研究院四川省食品药品检验检测院江南学
起草:史娜吴燕涛孙蕊王丽潘攀张丽华
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