第章 微生物绪常见考点
第章 绪
微生物分类命名
1微生物分类等级界门纲目科属种种基分类单位目前国际普遍采分类系统伯杰分类系统
2根微生物结构组成分三类型：
（1）非细胞型微生物：类微生物细胞结构种核酸蛋白衣壳组成必须寄生活细胞生长繁殖病毒类病毒朊病毒（称朊粒）
（2）原核细胞型微生物：类微生物单细胞组成细胞核分化程度低核膜核仁染色体裸露DNA分子缺乏完整细胞器细菌支原体衣原体立克次体螺旋体
（3）真核细胞型微生物：类微生物细胞核分化程度高核膜核仁完整细胞器真菌单细胞藻类
3种细菌DNA中G（鸟嘌呤）+C（胞嘧啶）含量摩尔百分定范围变化DNA（G+C）mol作细菌分类重
4微生物命名属名种名组成中文命名种名前属名拉丁文相反
：Mycobacterium tuberculosis
中文名 种名 + 属名
例 结核分枝杆菌
二微生物发展
1荷兰列文虎克发明显微镜类第次观察微生物
2法国科学家巴斯德称微生物学父
31929年弗莱明发现青霉素1940年FloreyChain青霉素分离提纯应床
5德国医生郭霍证明微生物传染病致病子
第二章 细菌基性状常见考点
细菌形态结构
（）细菌形态
1细菌体微通常微米作测量单位
2细菌基形态三类：球菌杆菌螺形菌
（二）细菌基结构
1细菌基结构外次细胞壁细胞膜细胞质核质
2根细胞壁化学组成结构革兰染色细菌分G＋G－两类
3磷壁酸革兰阳性菌细胞壁特结构壁磷壁酸革兰阳性菌重表面抗原膜磷壁酸黏附子
4外膜层革兰阴性菌特细胞壁特殊成分外次脂糖脂质双层脂蛋白中脂糖革兰阴性菌毒素脂质A毒素毒性部分
5革兰阴性菌革兰阳性菌细胞壁组成成分两者药物敏感性样革兰阳性菌细胞壁五肽交联桥青霉素作部位
6中介体：称中间体细胞膜陷折叠成状囊状结构功类似真核细胞线粒体称类线粒体
7质粒：细菌染色体（核质）外遗传物质双链闭环DNA分子携带遗传信息控制细菌某特定遗传性状F质粒控制性菌毛产生R质粒细菌耐药性关
（二）细菌特殊结构
1鞭毛：细菌运动器官细胞质伸出蛋白性丝状物
2菌毛：出现革兰阴性菌中分性菌毛普通菌毛
仅少数革兰阴性细菌具性菌毛较普通菌毛少1～4根普通菌毛长粗呈中空状两菌间传递遗传物质通道带性菌毛细菌称F+菌雄性菌菌毛细菌称F菌雌性菌细菌耐药性某毒力子均通种方式转移
3荚膜：通常机体营养物质丰富环境中形成细胞壁外包绕层界限分明易洗脱黏稠性物质
4芽胞：革兰阳性杆菌定条件细胞质核质浓缩脱水形成遮光性强具层膜状结构通透性低圆形卵圆形体
▲细菌L型细菌细胞壁缺陷型工诱导（少量青霉素头孢菌素存）然情况细菌L型体体外均产生
细菌L型含血清高渗低琼脂培养基中缓慢生长形成油煎蛋样菌落（典型L型细菌）：菌落较中心致密深陷琼脂中四周较薄透明颗粒组成低倍镜观察菌落呈油煎蛋状
细菌L型保留亲代遗传特性返祖致病
二细菌生理
1细菌基化学组成：水机盐蛋白质糖类脂类核酸（细菌含RNADNA两种核酸）
2细菌带电现象革兰阳性菌等电点约pH2～3革兰阴性菌等电点约pH4～5
（）细菌生长繁殖控制遗传变异
1细菌根营养类型分养菌（机物作原料）异养菌异氧菌根需营养物质分腐生菌（生命机物作原料）寄生菌（宿体机物作原料）
2细菌生长繁殖条件：
（1）充足营养物质：水碳源氮源机盐生长子
（2）合适pH：数细菌适pH72～76例外结核分支杆菌pH64～68霍乱弧菌pH84～92环境中生长
（3）合适温度： 35～37℃
（4）必气体
根细菌氧气 需求分：
①需氧菌：必须氧（空气）情况生长
②微需氧菌：5～6低氧环境中生长
③厌氧菌：必须氧环境中生长
④兼性厌氧菌：氧氧环境中均生长
3细菌生长繁殖规律
（1）细菌般性二分裂方式繁殖
（2）数细菌20～30分钟繁殖代结核需18～20时繁殖代
（3）细菌生长曲线分四时期：
①迟缓期：适应阶段阶段细菌繁殖般约1～4时
②数期：细菌形态染色性生理活性较典型观察细菌形态染色性抗菌药物敏感性等般约8～18时
③稳定期：细菌繁殖数死亡数致衡
④衰亡期：细菌死亡逐渐增死菌数超活菌数
4细菌合成代谢产物：热原质毒素（革兰阳性菌合成外毒素革兰阴性菌合成毒素）侵袭性酶类色素抗生素细菌素维生素
▲国规定生活饮水标准：1ml水中细菌总数超100cfu100ml水中检出肠埃希菌
5细菌控制：
（1）消毒：杀死物体病原微生物定杀死细菌芽胞方法
（2）灭菌：杀灭物体微生物包括细菌芽孢
（3）防腐：防止抑制微生物生长繁殖方法
（4）菌菌操作：菌指没活微生物存防止微生物进入机体者操作象方法称菌操作
（5）高压蒸汽灭菌法压力1034kPa温度1213℃维持1530分钟检测高压蒸汽灭菌效果细菌嗜热枯草芽孢杆菌
（6）牛奶等物品消毒方法巴氏消毒法
（7）紫外线杀菌机制干扰DNA复制
6正常情况体外界相器官细菌机体胃骨骼肌肉血液脑等菌滥抗生素会导致菌群失调发生系列病理反应
7细菌常见变异现象：
（1）形态结构变异：细菌L型①荚膜变异②鞭毛变异（HO变异）③芽胞变异
（2）菌落变异：SR变异细菌菌落光滑型粗造型间变异
（3）毒力变异：包括毒力加强毒力减弱
（4）抗原变异
（5）耐药性变异：细菌某种药物敏感变敏感
（6）酶活性变异
（7）生化特性变异
8细菌R质粒耐药质粒通细菌间接合通噬菌体进行传递
9细菌基转移重组方式转化接合转导溶原性转换原生质融合等
（1）转化：受体菌直接摄取供体菌提供游离DNA片段整合重组受体菌性状发生变异程
（2）转导：噬菌体媒介供体菌基转移受体菌导致受体菌基改变程
（3）接合：受体菌供体菌直接接触供体菌通性菌毛带F质粒类似遗传物质转移受体菌程
（4）溶原性转换：噬菌体DNA细菌染色体重组宿菌遗传结构发生改变引起遗传型变异
（5）原生质体融合：两种处理失细胞壁原生质体混发生融合融合双倍体细胞发生细菌染色体间重组
10细菌遗传物质染色体条环状闭合双螺旋DNA质粒细菌遗传物质遗传物质
第三章 微生物致病性感染常见考点
1病原微生物否致病病原体毒力数量侵入户机体免疫力环境素等密切相关
2细菌分泌侵袭性酶类：
（1）透明质酸酶：分解结缔组织透明质酸易细菌扩散
（2）胶原酶：分解细胞外基质胶原蛋白
（3）神氨酸酶：分解肠黏膜皮细胞细胞间质
（4）磷脂酶：水解细胞膜磷脂破坏组织细胞
（5）卵磷脂酶：分解细胞膜卵磷脂
（6）激酶：血纤维蛋白酶原激活纤维蛋白酶分解纤维蛋白防止形成血凝块
（7）凝固酶：血浆发生凝固保护细菌吞噬细胞吞噬杀灭
（8）IgA蛋白酶：细菌黏附关
3细菌毒素根源性质作特点分外毒素毒素
（1）外毒素特性：①革兰阳性菌产生②具菌种特异性③毒性作强④毒性作组织选择性⑤具良免疫原性：外毒素04甲醛处理失毒性保持免疫原性变类毒素刺激天产生抗毒素⑥耐热⑦蛋白质易酸蛋白水解酶灭活
（2）毒素特性：①革兰阴性菌产生②化学性质脂糖③抵抗力强耐热耐酸耐碱耐强氧化剂④细菌死亡溶解释放⑤毒性免疫原性均较外毒素弱甲醛处理成类毒素
4毒素生物学活性致热作白细胞增感染性休克DIC等
5细菌全身感染床常见种情况：
（1）毒血症：致病菌进入血液循环产生外毒素入血
（2）菌血症：致病菌侵入血流生长繁殖
（3）败血症：致病菌侵入血流中量繁殖产生毒性物质
（4）脓毒血症：化脓性细菌侵入血流量繁殖
（5）毒素血症：革兰阴性细菌侵入血流量繁殖崩解释放量毒素
第四章 细菌检验技术常见考点
细菌染色标镜检
▲染色标检查基程序涂片干燥固定染色镜检
（）革兰染色
1革兰染色两种染料先进行染色复染色法
2染液：结晶紫卢戈碘液95乙醇稀释苯酚复红液沙黄
3染色步骤：初染1min（结晶紫）→流水洗→媒染1min（卢戈碘液）→流水洗→脱色2030s（95乙醇）→流水洗→复染051min（稀释苯酚复红液沙黄）→流水洗→干燥→镜检
4意义：鉴细菌指导药指导床治疗
5结果判定：染紫色革兰阳性染红色革兰阴性
（二）抗酸染色
1抗酸染色两种染料先染色复染色法
2染液：苯酚复红3盐酸酒精吕氏碱性亚甲蓝
3染色步骤：初染5～8min（苯酚复红加热）→流水洗→脱色（3盐酸酒精）→流水洗→复染1min（吕氏亚甲蓝）→流水洗→干燥→镜检
4注意事项：①苯酚加热气切勿煮沸煮干②脱色脱红色染液脱止③痰标需酸碱处理痰液化接种
5床意义：般分枝杆菌属检查结核分枝杆菌麻风杆菌等
6结果判定：染成红色抗酸菌染成蓝色非抗酸菌
二细菌染色标镜检
▲压滴法悬滴法暗视野聚光法均观察细菌动力暗视野聚光法暗视野显微镜观察螺旋体动力
三细菌接种培养技术
1液体培养基肉浸液中加入1蛋白胨05NaCl调pH74蛋白胨作提供细菌生长繁殖需氮源
2半固体培养基液体培养基中加入02～05琼脂
3固体培养基液体培养基中加入2～3琼脂
4细菌L型培养基必须采高渗（3～5NaC l10～20蔗糖等）低琼脂培养基
5制备培养基放4℃活冷暗处般保存周超2周
6板划线接种法般含种细菌标利接种法单菌落分分区划线法连续划线法
7分区划线法区应区接触3～4次方法含菌量标粪便浓汁痰液等标连续划线法含菌量少标
8斜面接种法纯种增菌保留菌种生化反应
9穿刺接种法观察细菌动力鞭毛细菌穿刺线扩散生长
10液体接种法普通肉汤蛋白胨水等液体培养基接种
11细菌液体培养基生长现象三种分：①混浊（数细菌）②沉淀（链状生长细菌链球菌炭疽芽孢杆菌等）③菌膜（专性需氧菌铜绿假单胞菌等）
12血琼脂溶血现象：
α溶血：草绿色溶血菌落周围血培养基变绿色环状
β溶血：称完全溶血菌落周围形成完全清晰透明环
γ溶血：溶血菌落周围培养基没变化红细胞没溶解缺损
双环：层溶血环层θ溶血外层α溶血产气荚膜梭菌
13倾注板法水牛乳饮料尿液等液体标细菌计数
14常厌氧培养法：①疱肉培养基法②焦性没食子酸法③厌氧罐法④气袋法⑤厌氧手套箱法⑥气体喷射法
15常营养培养基：血板巧克力板
16鉴培养基：糖发酵三糖铁培养基枸橼酸盐培养基克氏双糖铁琼脂（KIA）伊红美蓝琼脂动力吲哚尿素（MIU）等培养基
17选择培养基：培养基中加入某种化学成分抗生素抑制某细菌生长助需细菌生长培养基称选择培养基SS琼脂中胆盐抑制革兰阳性菌沙门菌志贺菌容易分离
18增菌培养基：乙型溶血性链球菌肺炎链球菌生长需含血液血清培养基霍乱弧菌增菌常碱性蛋白胨水
19特殊培养基：包括厌氧培养基细菌L型培养基巯基乙醇酸钠特殊培养基厌氧培养基疱肉培养基细菌L型培养基针细胞壁缺陷细菌L型胞渗透压较高培养基必须采高渗低琼脂培养基
20细菌血液培养抗凝剂聚苯乙烯磺酸钠（SPS）
四细菌生化鉴定技术
（）碳水化合物代谢试验
1碳水化合物代谢试验包括：糖（醇苷）类发酵试验葡萄糖氧化发酵试验甲基红试验（MR）VP试验β半乳糖苷酶试验（ONPG）七叶苷水解试验
2甲基红试验原理细菌发酵葡萄糖产酸培养基pH降45加入甲基指示剂变红试验阳性
3VP试验出现红色阳性ONPG出现黄色阳性七叶苷水解试验出现黑色阳性VP试验常甲基红试验起前者阳性细菌者通常阴性
4七叶苷水解试验D族链球菌链球菌鉴前者阳性（黑色）
（二）蛋白质氨基酸代谢试验
1蛋白质氨基酸代谢试验包括：靛基质（吲哚）试验硫化氢试验尿素酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱羧酶试验
2吲哚试验细菌色氨酸酶分解色氨酸产生吲哚二甲基苯甲醛反应生成红色化合物试验呈现红色阳性
3硫化氢试验细菌分解含硫氨基酸产生H2SFe2+反应呈黑色阳性肠杆菌科中属种鉴沙门菌属爱德华菌属亚利桑菌属枸橼酸杆菌属变形杆菌属细菌绝数硫化氢阳性菌属阴性沙门菌属中硫化氢阴性菌种
4尿素酶试验细菌分解尿素生成氨培养基呈碱性指示剂变红阳性
5苯丙氨酸脱氨酶阳性结果绿色氨基酸脱羧酶阳性结果培养基黄色变紫色
（三）碳源利试验
1碳源利试验包括枸橼酸盐利试验丙二酸盐利试验
2枸橼酸盐利试验阳性结果深蓝色阴性绿色
3丙二酸盐利试验阳性结果深蓝色
4枸橼酸盐利试验肠杆菌科中埃希菌属志贺菌属爱德华菌属耶尔森菌属均阴性沙门菌属克雷伯菌属通常阳性
（四）酶类试验
1触酶试验：细菌催化氧化氢生成水氧气出现气泡阳性
2氧化酶试验：某细菌具细胞色素氧化酶二甲基苯二胺四甲基苯二胺氧化成红色化合物出现红色阳性
3凝固酶试验：金黄色葡萄球菌鉴定
4DNA酶试验：细菌产生DNA酶分解DNA菌落周围出现透明环葡萄球菌沙雷菌变形杆菌均阳性
5硝酸盐原试验：出现红色阳性加入试剂颜色反应：①硝酸盐没原试验阴性②硝酸盐原氨氮等产物导致假阴性结果时应试加入少许锌粉（原剂）出现红色表明试验确实阴性产生红色表示试验假阴性
（五）药敏鉴定试验
1CAMP试验：B群链球菌产生CAMP子促进葡萄球菌β溶血素溶解红细胞活性两菌（B群链球菌葡萄球菌）交界处溶血力增加出现箭头状矢形（半月形）溶血区链球菌中B群链球菌CAMP试验阳性作特异性鉴定
2胆汁溶菌试验：胆汁胆盐溶解肺炎链球菌胆汁降低细胞膜表面张力细胞膜破损菌体裂解者胆汁加速肺炎链球菌身溶程促细菌发生溶
3O129抑菌试验：O129抑菌试验药敏试验0／129（二氨基喋啶）弧菌属细菌抑制作气单胞菌属细菌抑制作
4杆菌肽试验：A群链球菌杆菌肽全部敏感群链球菌绝数耐药
5奥普托欣（Optochin）试验：肺炎链球菌奥普托欣试验敏感奥普托欣试验链球菌抑制作
五细菌毒力鉴定
▲毒素
常采鲎试验——毒素激活鲎试剂中凝固酶原转变凝固酶凝固蛋白原生成凝固蛋白
▲外毒素
常体体外毒力试验检测ELISA法测定
第五章 细菌抗菌药物敏感试验
床常抗菌药物
（）β酰胺类
1常见药物青霉素类头孢菌素类单环β酰胺类（氨曲南卡芦莫南）
2作机制：β酰胺类抗生素作机制相似均青霉素结合蛋白（PBP）结合抑制细菌细胞壁合成致细菌死亡
（二）氨基糖苷类
1作机制：①离子附作吸附菌体表面造成膜损伤②细菌核糖体30S亚基发生逆结合抑制mRNA转录蛋白质合成造成遗传密码错读产生意义蛋白质
2种类：①链霉菌属：链霉素卡霉素妥布霉素核糖霉素巴龙霉素新霉素
②单胞菌属：庆霉素福提霉素
③半合成氨基苷类：阿米卡星奈米星贝卡星等氨基苷类抗菌药物需氧G杆菌较强抗菌活性G+球菌定活性
（三）喹诺酮类
1作机制：①通外膜孔蛋白磷脂渗透进入细菌细胞②作DNA旋转酶干扰细菌DNA复制修复重组
2种类：①第代：窄谱抗菌药物G+球菌作作肠埃希菌迅速出现耐药较少应床
②第二代：GG+细菌均作较类药抗菌活性强度次环丙沙星氧氟沙星罗美沙星氟罗沙星培氟沙星诺氟沙星
③第三代：G+菌作高第二代4～8倍厌氧菌作司帕沙星妥舒沙星左氧氟沙星加沙星格帕沙星莫西沙星等
（四）环酯类
1作机制：逆结合细菌核糖体50S亚基23S单位抑制细菌蛋白质合成肽链延伸
2种类：国常红霉素吉霉素麦迪霉素乙酰螺旋霉素新代环酯类克拉霉素罗红霉素红霉素氟红霉素阿奇霉素乙酰麦迪霉素
（五）抗菌药物
▲磺胺类：竞争性第二氢叶酸合成酶结合阻止核酸形成
▲四环素类：阻止酰胺基转移酶RNAmRNA核糖体受体位点结合分短效（土霉素四环素）中效（美环素美环素）长效（西环素米诺环素）
▲氯霉素类林克霉素类：细菌核蛋白体50S亚基结合蛋白质合成呈逆性抑制
▲糖肽类：属杀菌剂肽聚糖合成中间产物形成复合物阻断肽聚糖合成阻止细胞壁合成包括万古霉素甲万古霉素考拉宁粘菌素杆菌肽等
◆环酯类抗生素抑菌剂
二抗菌药物敏感试验方法
▲细菌抗菌药物敏感分三种现象：敏感（S）耐药（R）中介（I）
（）扩散法（KB法）
1目前常方法种半定量方法采接种方法板涂布法
2抑菌圈反映检菌测定药物敏感程度该药检菌低抑菌浓度（MIC）呈负相关抑菌圈愈MIC愈
3含药纸片贴含菌琼脂表面时应注意：①纸片中心距离24mm纸片距板缘应15mm②旦碰触培养基动③板单独放超两叠放
4采标准菌株进行质控措施
◆金黄色葡萄球菌ATCC25923肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853粪肠球菌ATCC29212ATCC33186
5纸片扩散法培养基求pH值72～74高低pH值会影响药物效碱性扩氨基糖苷类药物抑菌圈酸性扩四环素类药物抑菌圈
★高频考点
1MBC低杀菌浓度
2体外联合药物敏感试验FIC （部分抑菌浓度指数）：FIC指数＜05 协作FIC指数05～1相加作FIC指数1～2 关作FIC指数＞2 拮抗作
3抗结核分枝杆菌首选线药物异烟肼利福
4产ESBL菌株床β酰胺类抗生素（青霉素类头孢菌素类氨曲南）治疗效
5耐甲氧西林金葡菌(MRSA)β酰胺类抗生素治疗效
6产AmpC酶菌株β酰胺类抗生素（青霉素类头孢菌素类氨曲南）含酶抑制剂复合制剂耐药治疗效药物碳青霉烯类(亚胺培南)第四代头(头孢吡肟头孢匹罗)某喹酮类氨基糖苷类抗生素
7药敏试验时采菌液浓度05麦氏浊度相15×10^8ml含菌量
第六章 菌属特征汇总
●葡萄球菌属
1葡萄球均属类触酶试验阳性革兰阳性（G＋）球菌鞭毛芽胞某菌株形成荚膜包括金黄色表皮腐生溶血葡萄球菌
2葡萄球菌触链球菌鉴触酶试验葡萄球菌触酶阳性链球菌阴性
3葡萄球菌致病性凝固酶试验致病性葡萄糖球菌阳性分解甘露醇产酸耐热DNA酶阳性见金黄色葡萄球菌
4葡萄球菌细胞壁葡萄球菌A蛋白（SPA）类IgGFc段结合进行协凝集试验
5葡萄球菌抵抗力强耐热耐干燥耐高盐抵抗力强芽胞细菌
6耐甲氧西林金葡菌（MRSA）耐甲氧西林表葡菌（MRSE）耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）耐万古霉素表皮葡萄球菌（VRSE）MRSA首选抗生素万古霉素
7表皮葡萄球菌医院感染重病原菌导致血培养污染常见细菌
8腐生葡萄球菌导致尿路感染常见病原菌
★凝固酶耐热DNA酶阳性选金黄色葡萄糖球菌
●链球菌属
1链球菌属群触酶试验阴性液体培养基呈链状排列革兰阳性（G＋）球菌陈旧培养基吞噬细胞吞噬常呈革兰阴性（G－）鞭毛芽胞
2肺炎链球菌矛头状排列产生溶酶菌落呈脐窝状鉴试验：奥普托欣试验（Optochin）阳性胆汁溶菌试验阳性荚膜肿胀试验阳性草绿色溶血圈菌社区获性肺炎常见病原菌
3A群链球菌杆菌肽试验鉴阳性产生溶血素红疹毒素前者血板形成β溶血环者引起猩红热类致病性90属A群
4B群链球菌水解马尿酸CAMP试验阳性
5D群链球菌七叶苷试验阳性
6草绿色链球菌引起亚急性心膜炎常见病原菌
7链球菌感染引起变态反应疾病风湿热肾球肾炎Ⅲ
8化脓性链球菌产生酶脱氧核糖核酸酶（链道酶）透明质酸酶（扩散子）链激酶（溶解纤维蛋白酶）种酶产生化脓性链球菌感染病灶范围广脓液稀薄边界清
9根溶血现象链球菌分甲型溶血性链球菌（α溶血）乙型溶血性链球菌（β溶血）丙型溶血性链球菌（γ溶血）
●肠球菌属
1肠球菌属肠道正常栖居菌G+成双短链状排列卵圆形球菌芽胞荚膜部分肠球菌稀疏鞭毛
2肠球菌高盐（65NaCl）高碱（pH96）40胆汁培养基10℃～45℃环境生长
●奈瑟菌属
1G呈肾形坦面相双球菌存中性粒细胞（胞外）鞭毛芽胞菌毛专性需氧氧化酶阳性
2血琼脂板巧克力琼脂EPV琼脂置5～10C02环境中35℃培养18～24h见圆形灰褐色湿润光滑边缘整齐直径1～2mm菌落
3淋病奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌麦芽糖发酵试验区前者发酵乳糖者发酵乳糖
4奈瑟菌属初次分离需510二氧化碳营养求高巧克力板
5脑膜炎奈瑟菌定植鼻咽部引起流脑少数引起败血症
6淋病奈瑟菌类唯宿怀疑奈瑟菌感染标需保温保湿送检
◆卡布兰汉菌：氧化酶触酶阳性产DNA酶部分菌株原硝酸盐亚硝酸盐营养求高普通培养基18～20℃生长奈瑟菌属相鉴
●肠杆菌科
1肠杆菌科特征：革兰氏阴性杆菌氧化酶阴性触酶硝酸盐原试验阳性
2肠杆菌中志贺克雷伯鼠疫耶尔菌属EIEC没鞭毛说动力阴性
3 O抗原H抗原肠杆菌科分群分型
4乳糖发酵区致病性非致病性致病性发酵乳糖非致病性发酵乳糖
●埃希菌属
1G短杆菌数周鞭毛菌毛荚膜微荚膜 兼性厌氧菌
2肠埃希菌EMB板带金属光泽呈蓝紫色菌落麦康凯SS琼脂呈粉红色菌落双糖铁发酵（KIA）产酸产气IMViC试验结果＋＋－－
5肠埃希菌肠道外感染尿系统感染常见肾盂肾炎
肠道感染：（1）产毒素性（ETEC）：引起旅游者腹泻婴腹泻
（2）肠致病性（EPEC）：婴腹泻
（3）肠侵袭性（EIEC）：类似志贺菌肠炎症状里急重
（4）肠出血性（EHEC）：常见血清型O157：H7引起出血性肠炎见婴幼引起溶血性尿毒症
（5）肠粘附性（EaggEC）：婴急性水样腹泻
●志贺菌属
1G短杆菌荚膜芽胞鞭毛菌毛需氧兼性厌氧
2志贺菌属细菌性痢疾常见病原菌中国常见福氏（B群）宋氏（D群）
3志贺菌属SS培养基中国蓝（麦康凯）板菌落红色粉红色
4志贺菌没鞭毛没H抗原O抗原K抗原
5志贺菌引起腹泻常里急重
●沙门菌属
1G直杆菌芽胞荚膜周鞭毛（鸡沙门菌）数菌毛
2SS琼脂麦康凯琼脂培养基：约2～4mm透明半透明菌落胆盐耐受产H2S者SS琼脂形成黑色中心菌落
3伤寒沙门菌抗原包括菌体（O）抗原鞭毛（H）抗原表面（Vi）抗原
4伤寒沙门菌检测肥达试验：已知伤寒沙门菌OH抗原副伤寒甲乙H抗原稀释检血清作定量凝集试验检测患者血清中抗体含量判断机体否受沙门菌感染导致肠热症判沙门菌种类
5菌体（O）抗原刺激机体产生抗体IgMH抗原IgG
6伤寒沙门菌感染1周取血液标2～3周取粪便3周取尿液
7致疾病：肠热症伤寒副伤寒病食物中毒 慢性肠炎败血症沙门菌局部感染颈部腰部等
●变形杆菌属
1G杆菌形周鞭毛芽胞荚膜
2营养求高普通培养基呈迁徙生长苯丙氨酸脱氨酶试验阳性重生化鉴反应
3变形杆菌X19X2Xk等类型O抗原立克次体抗原成分发生外斐反应
●耶尔森菌属4普通变性杆菌引起食物中毒奇异变性杆菌引起婴幼肠炎
1鼠疫耶尔森菌鼠疫病原菌国列甲类传染病
2鼠疫耶尔森菌G杆菌球杆状两极浓染荚膜鞭毛芽胞
3鼠疫耶尔森菌血板菌落柔软黏稠液体培养基中开始浑浊生长24时沉淀生长48时形成菌膜摇动呈钟乳石状沉半固体穿刺呈树状生长
4肠结肠耶尔森菌22～25℃培养周鞭毛呈翻滚螺旋运动35℃时培养该菌动力适生长温度20～28℃
5肠结肠耶尔森菌畜患病原菌
●弧菌属
1弧菌科氧化酶阳性动力阳性G细菌包括弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属等
2霍乱弧菌根生物学特性差异分古典生物型Eltor生物型两生物型两生物型抗原属O1群霍乱弧菌
3O1群霍乱弧菌根菌体抗原含ABC 3种抗原子分川型稻叶型彦岛型川型稻叶型常见流行型
4霍乱运动呈穿梭状流星状排列呈鱼群状亚碲酸钾培养基褐色菌落培养基碱性蛋白胨水致病物质霍乱肠毒素患者便呈米泔样便
5霍乱弧菌鉴培养硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂板（TCBS）
6霍乱弧菌碱性蛋白胨水生长迅速适pH84～92
7霍乱弧菌O1群O139群引起霍乱O2～O138群引起类胃肠炎称非O1群霍乱弧菌
8霍乱弧菌生物分型
9霍乱弧菌采集标时碱性蛋白胨水中增菌应置文腊二氏保存液活卡布运送培养基中专运送
10副溶血性弧菌种嗜盐菌常存海水海类产品中海区食物中毒常见病原菌
11副溶血性弧菌霍乱区蔗糖发酵试验前者发酵蔗糖TCBS呈蓝绿色菌落者呈黄色菌落
12副溶血性弧菌兔红细胞发生溶血马红细胞溶血称神奈川现象
●菌属特征高频考点
1肺炎克雷伯菌动力鸟氨酸脱羧酶阴性黏液状菌落接种环拉丝特征
2结：志贺菌IMViC（+）肠埃希菌IMViC（++）产气肠杆菌IMViC（++）
3气单胞菌属运动活泼血板形成扁β溶血性菌落嗜水气单胞菌豚鼠气单胞菌发酵阿拉伯糖
4邻单胞菌属引起水样腹泻志贺菌类似引起食物中毒
5假单胞菌属产检杆菌属动杆菌属等发酵葡萄糖均非发酵革兰阴性杆菌
6铜绿假单胞菌专性需氧菌普通培养基菌落生姜味产生水溶性绿色素血板产生透明溶血环该菌42℃生长通该试验区分假单胞菌
7铜绿假单胞菌引起泌尿道皮肤呼吸道烧伤创面感染等导致菌血症败血症心膜炎囊性纤维变性婴幼严重腹泻等
8动杆菌属三阴特征氧化酶动力硝酸盐原试验均阴性
9流感嗜血杆菌产生溶酶生长需ⅤⅩ子培养特殊求营养求高初次分离需5～10CO2巧克力板金黄色葡萄糖球菌（产生ⅤⅩ子）时候会出现卫星生长现象
嗜血杆菌菌落呈露滴状
副流感嗜血杆菌形态菌落 流感嗜血杆菌相似产生卫星现象生长程中需V子需X子
10军团菌属培养求特殊培养基中必须含半胱氨酸铁培养基活性炭酵母浸液琼脂培养基（BCYE）传播途径空气
12布鲁菌属畜患病原菌包括羊牛猪狗绵羊布鲁菌等引起布病果做题什草原养羊羊接触史话选布鲁菌感染
13弯曲菌属分解糖类氧化酶阳性分离培养时培养基中需含量抗生素初次分离须5O210CO285N2气体环境中生长
14幽门螺杆菌呈海鸥状弯曲脲酶强阳性（快速分解尿素）特征标采集部位胃十二指肠
15白喉棒状杆菌特异性标志异染颗粒亚碲酸钾培养基黑色菌落培养基选吕氏血清斜面亚碲酸钾致
19炭疽芽孢杆菌毫升含005～05U青霉素培养基中发生形态变异形成均匀圆球状相连串珠状称串
抗酸染色分级报告标准：①－：连续观察300视野未发现抗酸杆菌②±：1～2条300视野③1＋：1～9抗酸杆菌条100视野④2＋：1～9条抗酸杆菌10视野⑤3＋：1～9条抗酸杆菌视野⑥4＋：≥10条抗酸杆菌视野
27麻风分枝杆菌典型胞寄生细胞呈泡沫状称麻风细胞犰狳菌高度敏感菌良动物模型抗酸染色阳性杆菌
28厌氧菌属特征氧条件生长怀疑厌氧菌感染疱肉培养基培养
29破伤风梭菌严格厌氧周鞭毛荚膜芽胞呈正圆形宽菌体位菌体顶端细菌呈鼓槌状菌致病物质外毒素包括破伤风痉挛毒素破伤风溶血毒素引起强直性痉挛
30产气荚膜梭菌引起气性坏疽牛乳培养基中汹涌发酵生长特征
31肉毒梭菌引起食物中毒致病物质肉毒毒素已知剧烈神外毒素怀疑食物中毒患者血清中检出毒素直接效方法
32艰难梭菌引起腹泻假膜性肠炎
33衣原体细胞专性寄生独特发育周期：①原体高度感染性繁殖力②始体（网状体）繁殖力没感染性发育周期40～72h
34沙眼衣原体培养McCoy细胞鹦鹉热衣原体肺炎衣原体Hela299细胞培养
35沙眼衣原体引起四种疾病：①沙眼②包涵体结膜炎致盲素包涵体结膜炎③泌尿生殖道感染非淋菌性生殖道感染病原男性尿道炎常见病④性淋巴肉芽肿：称第四性病
36鹦鹉热衣原体气溶胶传播引起非典型肺炎（畜患病原体）
37肺炎衣原体呼吸道传播引起肺炎
38支原体细胞壁工培养基生长通细菌滤器原核细胞型微生物典型特征菌落荷包蛋样治疗药物首选红霉素
39肺炎支原体通呼吸道传播引起原发性非典型肺炎
40解脲支原体通性传播引起非淋菌性尿道炎
41立克次体细胞寄生头痛发热皮疹中枢神病特征立克次体重试验外斐试验非特异性凝集试验
42立克次体工培养检测利变性杆菌公抗原检测（抗原）OX19应流行性斑疹伤寒鼠型斑疹伤寒OX2应斑点热OXK应恙虫病
43钩端螺旋体通疫水传播典型畜患病鼠猪常见储存宿传染源种然疫源性疾病治疗药物首选青霉素
44梅毒螺旋体密螺旋体镀银染色
45梅毒三期分型期硬疳二期梅毒疹三期梅毒瘤
46早期梅毒传染性强破坏力晚期破坏力传染性
47梅毒通性传播输血传播垂直传播
48梅毒检查非特异性试验牛心类脂质WHO推荐VDRL（性病研究实验室试验）RPR（快速血浆反应素试验）做筛查确诊试验TPPA
49放线菌患者病灶硫磺颗粒菌体呈菊花状菌落R型转变S型
50诺卡菌属星型诺卡巴西诺卡致病星型诺卡菌落表面白色菌丝巴西诺卡表面白色菌丝诺卡菌属抗酸染色弱阳性诺卡菌革兰氏阳性杆菌细长菌丝菌丝末端膨色素颗粒压碎染色镜检见颗粒呈菊花状种类产生色素橙红粉红黄黄绿紫颜色巴西诺卡菌七叶苷黄嘌呤肌醇甘露醇均阳性星型分解黄嘌呤
●真菌常见考点
1真菌检测标皮屑指甲头发等需10KOH处理
2真菌培养般选沙氏培养基
3白假丝酵母菌鉴点：①芽形成试验（＋）②厚膜孢子形成试验（＋）③脲酶试验（－）④形成假菌丝⑤革兰阳性
4新型隐球菌鉴点：①墨汁染色黑色背景见透亮菌体宽厚荚膜②沙保弱培养基生成酵母型菌落③脲酶试验（＋）
5艾滋病易合感染真菌卡氏肺孢子菌
6黄曲霉菌产生黄曲霉毒素致癌
●病毒常见考点
1病毒非细胞型微生物基结构核心衣壳
2流感病毒包膜RNA病毒包膜血凝素（HA）神氨酸酶（NA）重表面抗原中HA极易发生变异病毒命名方式HXNX（X型号H1N1H2N2等）
3麻疹病毒单股包膜RNA病毒引起病毒血症发病2天口腔黏膜出现白色外绕红晕黏膜斑（早期诊断重意义）患者皮肤相继出现红色版丘疹常见发症肺炎
4腮腺炎病毒包膜RNA病毒感染引起侧双侧腮腺肿青春期感染者男性易发睾丸炎
5甲型肝炎病毒（HAV）包膜RNA病毒传播途径粪口传播引起甲肝引起病毒血症产生甲肝抗体IgMELISA检测捕获法
6乙型肝炎病毒（HBV）DNA病毒引起乙肝严重发展肝癌
常见考点：①HBV球型颗粒（Dane）感染性②乙肝两半：HBsAg抗HBsHBeAg抗HBe抗HBc③三阳指HBsAgHBeAg抗HBc均阳性种模式急性乙肝传染性极强④三阳指HBsAg抗HBe抗HBc种模式感染趋恢复期⑤乙肝保护性抗体指抗HBs⑥HBeAg阳性表示乙肝传染性极强⑦抗HBs抗HBs抗HB
16细菌特殊结构包括：鞭毛菌毛荚膜芽胞
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第章 绪
微生物分类命名
1微生物分类等级界门纲目科属种种基分类单位目前国际普遍采分类系统伯杰分类系统
2根微生物结构组成分三类型：
（1）非细胞型微生物：类微生物细胞结构种核酸蛋白衣壳组成必须寄生活细胞生长繁殖病毒类病毒朊病毒（称朊粒）
（2）原核细胞型微生物：类微生物单细胞组成细胞核分化程度低核膜核仁染色体裸露DNA分子缺乏完整细胞器细菌支原体衣原体立克次体螺旋体
（3）真核细胞型微生物：类微生物细胞核分化程度高核膜核仁完整细胞器真菌单细胞藻类
3种细菌DNA中G（鸟嘌呤）+C（胞嘧啶）含量摩尔百分定范围变化DNA（G+C）mol作细菌分类重
4微生物命名属名种名组成中文命名种名前属名拉丁文相反
：Mycobacterium tuberculosis
中文名 种名 + 属名
例 结核分枝杆菌
二微生物发展
1荷兰列文虎克发明显微镜类第次观察微生物
2法国科学家巴斯德称微生物学父
31929年弗莱明发现青霉素1940年FloreyChain青霉素分离提纯应床
5德国医生郭霍证明微生物传染病致病子
第二章 细菌基性状常见考点
细菌形态结构
（）细菌形态
1细菌体微通常微米作测量单位
2细菌基形态三类：球菌杆菌螺形菌
（二）细菌基结构
1细菌基结构外次细胞壁细胞膜细胞质核质
2根细胞壁化学组成结构革兰染色细菌分G＋G－两类
3磷壁酸革兰阳性菌细胞壁特结构壁磷壁酸革兰阳性菌重表面抗原膜磷壁酸黏附子
4外膜层革兰阴性菌特细胞壁特殊成分外次脂糖脂质双层脂蛋白中脂糖革兰阴性菌毒素脂质A毒素毒性部分
5革兰阴性菌革兰阳性菌细胞壁组成成分两者药物敏感性样革兰阳性菌细胞壁五肽交联桥青霉素作部位
6中介体：称中间体细胞膜陷折叠成状囊状结构功类似真核细胞线粒体称类线粒体
7质粒：细菌染色体（核质）外遗传物质双链闭环DNA分子携带遗传信息控制细菌某特定遗传性状F质粒控制性菌毛产生R质粒细菌耐药性关
（二）细菌特殊结构
1鞭毛：细菌运动器官细胞质伸出蛋白性丝状物
2菌毛：出现革兰阴性菌中分性菌毛普通菌毛
仅少数革兰阴性细菌具性菌毛较普通菌毛少1～4根普通菌毛长粗呈中空状两菌间传递遗传物质通道带性菌毛细菌称F+菌雄性菌菌毛细菌称F菌雌性菌细菌耐药性某毒力子均通种方式转移
3荚膜：通常机体营养物质丰富环境中形成细胞壁外包绕层界限分明易洗脱黏稠性物质
4芽胞：革兰阳性杆菌定条件细胞质核质浓缩脱水形成遮光性强具层膜状结构通透性低圆形卵圆形体
▲细菌L型细菌细胞壁缺陷型工诱导（少量青霉素头孢菌素存）然情况细菌L型体体外均产生
细菌L型含血清高渗低琼脂培养基中缓慢生长形成油煎蛋样菌落（典型L型细菌）：菌落较中心致密深陷琼脂中四周较薄透明颗粒组成低倍镜观察菌落呈油煎蛋状
细菌L型保留亲代遗传特性返祖致病
二细菌生理
1细菌基化学组成：水机盐蛋白质糖类脂类核酸（细菌含RNADNA两种核酸）
2细菌带电现象革兰阳性菌等电点约pH2～3革兰阴性菌等电点约pH4～5
（）细菌生长繁殖控制遗传变异
1细菌根营养类型分养菌（机物作原料）异养菌异氧菌根需营养物质分腐生菌（生命机物作原料）寄生菌（宿体机物作原料）
2细菌生长繁殖条件：
（1）充足营养物质：水碳源氮源机盐生长子
（2）合适pH：数细菌适pH72～76例外结核分支杆菌pH64～68霍乱弧菌pH84～92环境中生长
（3）合适温度： 35～37℃
（4）必气体
根细菌氧气 需求分：
①需氧菌：必须氧（空气）情况生长
②微需氧菌：5～6低氧环境中生长
③厌氧菌：必须氧环境中生长
④兼性厌氧菌：氧氧环境中均生长
3细菌生长繁殖规律
（1）细菌般性二分裂方式繁殖
（2）数细菌20～30分钟繁殖代结核需18～20时繁殖代
（3）细菌生长曲线分四时期：
①迟缓期：适应阶段阶段细菌繁殖般约1～4时
②数期：细菌形态染色性生理活性较典型观察细菌形态染色性抗菌药物敏感性等般约8～18时
③稳定期：细菌繁殖数死亡数致衡
④衰亡期：细菌死亡逐渐增死菌数超活菌数
4细菌合成代谢产物：热原质毒素（革兰阳性菌合成外毒素革兰阴性菌合成毒素）侵袭性酶类色素抗生素细菌素维生素
▲国规定生活饮水标准：1ml水中细菌总数超100cfu100ml水中检出肠埃希菌
5细菌控制：
（1）消毒：杀死物体病原微生物定杀死细菌芽胞方法
（2）灭菌：杀灭物体微生物包括细菌芽孢
（3）防腐：防止抑制微生物生长繁殖方法
（4）菌菌操作：菌指没活微生物存防止微生物进入机体者操作象方法称菌操作
（5）高压蒸汽灭菌法压力1034kPa温度1213℃维持1530分钟检测高压蒸汽灭菌效果细菌嗜热枯草芽孢杆菌
（6）牛奶等物品消毒方法巴氏消毒法
（7）紫外线杀菌机制干扰DNA复制
6正常情况体外界相器官细菌机体胃骨骼肌肉血液脑等菌滥抗生素会导致菌群失调发生系列病理反应
7细菌常见变异现象：
（1）形态结构变异：细菌L型①荚膜变异②鞭毛变异（HO变异）③芽胞变异
（2）菌落变异：SR变异细菌菌落光滑型粗造型间变异
（3）毒力变异：包括毒力加强毒力减弱
（4）抗原变异
（5）耐药性变异：细菌某种药物敏感变敏感
（6）酶活性变异
（7）生化特性变异
8细菌R质粒耐药质粒通细菌间接合通噬菌体进行传递
9细菌基转移重组方式转化接合转导溶原性转换原生质融合等
（1）转化：受体菌直接摄取供体菌提供游离DNA片段整合重组受体菌性状发生变异程
（2）转导：噬菌体媒介供体菌基转移受体菌导致受体菌基改变程
（3）接合：受体菌供体菌直接接触供体菌通性菌毛带F质粒类似遗传物质转移受体菌程
（4）溶原性转换：噬菌体DNA细菌染色体重组宿菌遗传结构发生改变引起遗传型变异
（5）原生质体融合：两种处理失细胞壁原生质体混发生融合融合双倍体细胞发生细菌染色体间重组
10细菌遗传物质染色体条环状闭合双螺旋DNA质粒细菌遗传物质遗传物质
第三章 微生物致病性感染常见考点
1病原微生物否致病病原体毒力数量侵入户机体免疫力环境素等密切相关
2细菌分泌侵袭性酶类：
（1）透明质酸酶：分解结缔组织透明质酸易细菌扩散
（2）胶原酶：分解细胞外基质胶原蛋白
（3）神氨酸酶：分解肠黏膜皮细胞细胞间质
（4）磷脂酶：水解细胞膜磷脂破坏组织细胞
（5）卵磷脂酶：分解细胞膜卵磷脂
（6）激酶：血纤维蛋白酶原激活纤维蛋白酶分解纤维蛋白防止形成血凝块
（7）凝固酶：血浆发生凝固保护细菌吞噬细胞吞噬杀灭
（8）IgA蛋白酶：细菌黏附关
3细菌毒素根源性质作特点分外毒素毒素
（1）外毒素特性：①革兰阳性菌产生②具菌种特异性③毒性作强④毒性作组织选择性⑤具良免疫原性：外毒素04甲醛处理失毒性保持免疫原性变类毒素刺激天产生抗毒素⑥耐热⑦蛋白质易酸蛋白水解酶灭活
（2）毒素特性：①革兰阴性菌产生②化学性质脂糖③抵抗力强耐热耐酸耐碱耐强氧化剂④细菌死亡溶解释放⑤毒性免疫原性均较外毒素弱甲醛处理成类毒素
4毒素生物学活性致热作白细胞增感染性休克DIC等
5细菌全身感染床常见种情况：
（1）毒血症：致病菌进入血液循环产生外毒素入血
（2）菌血症：致病菌侵入血流生长繁殖
（3）败血症：致病菌侵入血流中量繁殖产生毒性物质
（4）脓毒血症：化脓性细菌侵入血流量繁殖
（5）毒素血症：革兰阴性细菌侵入血流量繁殖崩解释放量毒素
第四章 细菌检验技术常见考点
细菌染色标镜检
▲染色标检查基程序涂片干燥固定染色镜检
（）革兰染色
1革兰染色两种染料先进行染色复染色法
2染液：结晶紫卢戈碘液95乙醇稀释苯酚复红液沙黄
3染色步骤：初染1min（结晶紫）→流水洗→媒染1min（卢戈碘液）→流水洗→脱色2030s（95乙醇）→流水洗→复染051min（稀释苯酚复红液沙黄）→流水洗→干燥→镜检
4意义：鉴细菌指导药指导床治疗
5结果判定：染紫色革兰阳性染红色革兰阴性
（二）抗酸染色
1抗酸染色两种染料先染色复染色法
2染液：苯酚复红3盐酸酒精吕氏碱性亚甲蓝
3染色步骤：初染5～8min（苯酚复红加热）→流水洗→脱色（3盐酸酒精）→流水洗→复染1min（吕氏亚甲蓝）→流水洗→干燥→镜检
4注意事项：①苯酚加热气切勿煮沸煮干②脱色脱红色染液脱止③痰标需酸碱处理痰液化接种
5床意义：般分枝杆菌属检查结核分枝杆菌麻风杆菌等
6结果判定：染成红色抗酸菌染成蓝色非抗酸菌
二细菌染色标镜检
▲压滴法悬滴法暗视野聚光法均观察细菌动力暗视野聚光法暗视野显微镜观察螺旋体动力
三细菌接种培养技术
1液体培养基肉浸液中加入1蛋白胨05NaCl调pH74蛋白胨作提供细菌生长繁殖需氮源
2半固体培养基液体培养基中加入02～05琼脂
3固体培养基液体培养基中加入2～3琼脂
4细菌L型培养基必须采高渗（3～5NaC l10～20蔗糖等）低琼脂培养基
5制备培养基放4℃活冷暗处般保存周超2周
6板划线接种法般含种细菌标利接种法单菌落分分区划线法连续划线法
7分区划线法区应区接触3～4次方法含菌量标粪便浓汁痰液等标连续划线法含菌量少标
8斜面接种法纯种增菌保留菌种生化反应
9穿刺接种法观察细菌动力鞭毛细菌穿刺线扩散生长
10液体接种法普通肉汤蛋白胨水等液体培养基接种
11细菌液体培养基生长现象三种分：①混浊（数细菌）②沉淀（链状生长细菌链球菌炭疽芽孢杆菌等）③菌膜（专性需氧菌铜绿假单胞菌等）
12血琼脂溶血现象：
α溶血：草绿色溶血菌落周围血培养基变绿色环状
β溶血：称完全溶血菌落周围形成完全清晰透明环
γ溶血：溶血菌落周围培养基没变化红细胞没溶解缺损
双环：层溶血环层θ溶血外层α溶血产气荚膜梭菌
13倾注板法水牛乳饮料尿液等液体标细菌计数
14常厌氧培养法：①疱肉培养基法②焦性没食子酸法③厌氧罐法④气袋法⑤厌氧手套箱法⑥气体喷射法
15常营养培养基：血板巧克力板
16鉴培养基：糖发酵三糖铁培养基枸橼酸盐培养基克氏双糖铁琼脂（KIA）伊红美蓝琼脂动力吲哚尿素（MIU）等培养基
17选择培养基：培养基中加入某种化学成分抗生素抑制某细菌生长助需细菌生长培养基称选择培养基SS琼脂中胆盐抑制革兰阳性菌沙门菌志贺菌容易分离
18增菌培养基：乙型溶血性链球菌肺炎链球菌生长需含血液血清培养基霍乱弧菌增菌常碱性蛋白胨水
19特殊培养基：包括厌氧培养基细菌L型培养基巯基乙醇酸钠特殊培养基厌氧培养基疱肉培养基细菌L型培养基针细胞壁缺陷细菌L型胞渗透压较高培养基必须采高渗低琼脂培养基
20细菌血液培养抗凝剂聚苯乙烯磺酸钠（SPS）
四细菌生化鉴定技术
（）碳水化合物代谢试验
1碳水化合物代谢试验包括：糖（醇苷）类发酵试验葡萄糖氧化发酵试验甲基红试验（MR）VP试验β半乳糖苷酶试验（ONPG）七叶苷水解试验
2甲基红试验原理细菌发酵葡萄糖产酸培养基pH降45加入甲基指示剂变红试验阳性
3VP试验出现红色阳性ONPG出现黄色阳性七叶苷水解试验出现黑色阳性VP试验常甲基红试验起前者阳性细菌者通常阴性
4七叶苷水解试验D族链球菌链球菌鉴前者阳性（黑色）
（二）蛋白质氨基酸代谢试验
1蛋白质氨基酸代谢试验包括：靛基质（吲哚）试验硫化氢试验尿素酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱羧酶试验
2吲哚试验细菌色氨酸酶分解色氨酸产生吲哚二甲基苯甲醛反应生成红色化合物试验呈现红色阳性
3硫化氢试验细菌分解含硫氨基酸产生H2SFe2+反应呈黑色阳性肠杆菌科中属种鉴沙门菌属爱德华菌属亚利桑菌属枸橼酸杆菌属变形杆菌属细菌绝数硫化氢阳性菌属阴性沙门菌属中硫化氢阴性菌种
4尿素酶试验细菌分解尿素生成氨培养基呈碱性指示剂变红阳性
5苯丙氨酸脱氨酶阳性结果绿色氨基酸脱羧酶阳性结果培养基黄色变紫色
（三）碳源利试验
1碳源利试验包括枸橼酸盐利试验丙二酸盐利试验
2枸橼酸盐利试验阳性结果深蓝色阴性绿色
3丙二酸盐利试验阳性结果深蓝色
4枸橼酸盐利试验肠杆菌科中埃希菌属志贺菌属爱德华菌属耶尔森菌属均阴性沙门菌属克雷伯菌属通常阳性
（四）酶类试验
1触酶试验：细菌催化氧化氢生成水氧气出现气泡阳性
2氧化酶试验：某细菌具细胞色素氧化酶二甲基苯二胺四甲基苯二胺氧化成红色化合物出现红色阳性
3凝固酶试验：金黄色葡萄球菌鉴定
4DNA酶试验：细菌产生DNA酶分解DNA菌落周围出现透明环葡萄球菌沙雷菌变形杆菌均阳性
5硝酸盐原试验：出现红色阳性加入试剂颜色反应：①硝酸盐没原试验阴性②硝酸盐原氨氮等产物导致假阴性结果时应试加入少许锌粉（原剂）出现红色表明试验确实阴性产生红色表示试验假阴性
（五）药敏鉴定试验
1CAMP试验：B群链球菌产生CAMP子促进葡萄球菌β溶血素溶解红细胞活性两菌（B群链球菌葡萄球菌）交界处溶血力增加出现箭头状矢形（半月形）溶血区链球菌中B群链球菌CAMP试验阳性作特异性鉴定
2胆汁溶菌试验：胆汁胆盐溶解肺炎链球菌胆汁降低细胞膜表面张力细胞膜破损菌体裂解者胆汁加速肺炎链球菌身溶程促细菌发生溶
3O129抑菌试验：O129抑菌试验药敏试验0／129（二氨基喋啶）弧菌属细菌抑制作气单胞菌属细菌抑制作
4杆菌肽试验：A群链球菌杆菌肽全部敏感群链球菌绝数耐药
5奥普托欣（Optochin）试验：肺炎链球菌奥普托欣试验敏感奥普托欣试验链球菌抑制作
五细菌毒力鉴定
▲毒素
常采鲎试验——毒素激活鲎试剂中凝固酶原转变凝固酶凝固蛋白原生成凝固蛋白
▲外毒素
常体体外毒力试验检测ELISA法测定
第五章 细菌抗菌药物敏感试验
床常抗菌药物
（）β酰胺类
1常见药物青霉素类头孢菌素类单环β酰胺类（氨曲南卡芦莫南）
2作机制：β酰胺类抗生素作机制相似均青霉素结合蛋白（PBP）结合抑制细菌细胞壁合成致细菌死亡
（二）氨基糖苷类
1作机制：①离子附作吸附菌体表面造成膜损伤②细菌核糖体30S亚基发生逆结合抑制mRNA转录蛋白质合成造成遗传密码错读产生意义蛋白质
2种类：①链霉菌属：链霉素卡霉素妥布霉素核糖霉素巴龙霉素新霉素
②单胞菌属：庆霉素福提霉素
③半合成氨基苷类：阿米卡星奈米星贝卡星等氨基苷类抗菌药物需氧G杆菌较强抗菌活性G+球菌定活性
（三）喹诺酮类
1作机制：①通外膜孔蛋白磷脂渗透进入细菌细胞②作DNA旋转酶干扰细菌DNA复制修复重组
2种类：①第代：窄谱抗菌药物G+球菌作作肠埃希菌迅速出现耐药较少应床
②第二代：GG+细菌均作较类药抗菌活性强度次环丙沙星氧氟沙星罗美沙星氟罗沙星培氟沙星诺氟沙星
③第三代：G+菌作高第二代4～8倍厌氧菌作司帕沙星妥舒沙星左氧氟沙星加沙星格帕沙星莫西沙星等
（四）环酯类
1作机制：逆结合细菌核糖体50S亚基23S单位抑制细菌蛋白质合成肽链延伸
2种类：国常红霉素吉霉素麦迪霉素乙酰螺旋霉素新代环酯类克拉霉素罗红霉素红霉素氟红霉素阿奇霉素乙酰麦迪霉素
（五）抗菌药物
▲磺胺类：竞争性第二氢叶酸合成酶结合阻止核酸形成
▲四环素类：阻止酰胺基转移酶RNAmRNA核糖体受体位点结合分短效（土霉素四环素）中效（美环素美环素）长效（西环素米诺环素）
▲氯霉素类林克霉素类：细菌核蛋白体50S亚基结合蛋白质合成呈逆性抑制
▲糖肽类：属杀菌剂肽聚糖合成中间产物形成复合物阻断肽聚糖合成阻止细胞壁合成包括万古霉素甲万古霉素考拉宁粘菌素杆菌肽等
◆环酯类抗生素抑菌剂
二抗菌药物敏感试验方法
▲细菌抗菌药物敏感分三种现象：敏感（S）耐药（R）中介（I）
（）扩散法（KB法）
1目前常方法种半定量方法采接种方法板涂布法
2抑菌圈反映检菌测定药物敏感程度该药检菌低抑菌浓度（MIC）呈负相关抑菌圈愈MIC愈
3含药纸片贴含菌琼脂表面时应注意：①纸片中心距离24mm纸片距板缘应15mm②旦碰触培养基动③板单独放超两叠放
4采标准菌株进行质控措施
◆金黄色葡萄球菌ATCC25923肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853粪肠球菌ATCC29212ATCC33186
5纸片扩散法培养基求pH值72～74高低pH值会影响药物效碱性扩氨基糖苷类药物抑菌圈酸性扩四环素类药物抑菌圈
★高频考点
1MBC低杀菌浓度
2体外联合药物敏感试验FIC （部分抑菌浓度指数）：FIC指数＜05 协作FIC指数05～1相加作FIC指数1～2 关作FIC指数＞2 拮抗作
3抗结核分枝杆菌首选线药物异烟肼利福
4产ESBL菌株床β酰胺类抗生素（青霉素类头孢菌素类氨曲南）治疗效
5耐甲氧西林金葡菌(MRSA)β酰胺类抗生素治疗效
6产AmpC酶菌株β酰胺类抗生素（青霉素类头孢菌素类氨曲南）含酶抑制剂复合制剂耐药治疗效药物碳青霉烯类(亚胺培南)第四代头(头孢吡肟头孢匹罗)某喹酮类氨基糖苷类抗生素
7药敏试验时采菌液浓度05麦氏浊度相15×10^8ml含菌量
第六章 菌属特征汇总
●葡萄球菌属
1葡萄球均属类触酶试验阳性革兰阳性（G＋）球菌鞭毛芽胞某菌株形成荚膜包括金黄色表皮腐生溶血葡萄球菌
2葡萄球菌触链球菌鉴触酶试验葡萄球菌触酶阳性链球菌阴性
3葡萄球菌致病性凝固酶试验致病性葡萄糖球菌阳性分解甘露醇产酸耐热DNA酶阳性见金黄色葡萄球菌
4葡萄球菌细胞壁葡萄球菌A蛋白（SPA）类IgGFc段结合进行协凝集试验
5葡萄球菌抵抗力强耐热耐干燥耐高盐抵抗力强芽胞细菌
6耐甲氧西林金葡菌（MRSA）耐甲氧西林表葡菌（MRSE）耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）耐万古霉素表皮葡萄球菌（VRSE）MRSA首选抗生素万古霉素
7表皮葡萄球菌医院感染重病原菌导致血培养污染常见细菌
8腐生葡萄球菌导致尿路感染常见病原菌
★凝固酶耐热DNA酶阳性选金黄色葡萄糖球菌
●链球菌属
1链球菌属群触酶试验阴性液体培养基呈链状排列革兰阳性（G＋）球菌陈旧培养基吞噬细胞吞噬常呈革兰阴性（G－）鞭毛芽胞
2肺炎链球菌矛头状排列产生溶酶菌落呈脐窝状鉴试验：奥普托欣试验（Optochin）阳性胆汁溶菌试验阳性荚膜肿胀试验阳性草绿色溶血圈菌社区获性肺炎常见病原菌
3A群链球菌杆菌肽试验鉴阳性产生溶血素红疹毒素前者血板形成β溶血环者引起猩红热类致病性90属A群
4B群链球菌水解马尿酸CAMP试验阳性
5D群链球菌七叶苷试验阳性
6草绿色链球菌引起亚急性心膜炎常见病原菌
7链球菌感染引起变态反应疾病风湿热肾球肾炎Ⅲ
8化脓性链球菌产生酶脱氧核糖核酸酶（链道酶）透明质酸酶（扩散子）链激酶（溶解纤维蛋白酶）种酶产生化脓性链球菌感染病灶范围广脓液稀薄边界清
9根溶血现象链球菌分甲型溶血性链球菌（α溶血）乙型溶血性链球菌（β溶血）丙型溶血性链球菌（γ溶血）
●肠球菌属
1肠球菌属肠道正常栖居菌G+成双短链状排列卵圆形球菌芽胞荚膜部分肠球菌稀疏鞭毛
2肠球菌高盐（65NaCl）高碱（pH96）40胆汁培养基10℃～45℃环境生长
●奈瑟菌属
1G呈肾形坦面相双球菌存中性粒细胞（胞外）鞭毛芽胞菌毛专性需氧氧化酶阳性
2血琼脂板巧克力琼脂EPV琼脂置5～10C02环境中35℃培养18～24h见圆形灰褐色湿润光滑边缘整齐直径1～2mm菌落
3淋病奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌麦芽糖发酵试验区前者发酵乳糖者发酵乳糖
4奈瑟菌属初次分离需510二氧化碳营养求高巧克力板
5脑膜炎奈瑟菌定植鼻咽部引起流脑少数引起败血症
6淋病奈瑟菌类唯宿怀疑奈瑟菌感染标需保温保湿送检
◆卡布兰汉菌：氧化酶触酶阳性产DNA酶部分菌株原硝酸盐亚硝酸盐营养求高普通培养基18～20℃生长奈瑟菌属相鉴
●肠杆菌科
1肠杆菌科特征：革兰氏阴性杆菌氧化酶阴性触酶硝酸盐原试验阳性
2肠杆菌中志贺克雷伯鼠疫耶尔菌属EIEC没鞭毛说动力阴性
3 O抗原H抗原肠杆菌科分群分型
4乳糖发酵区致病性非致病性致病性发酵乳糖非致病性发酵乳糖
●埃希菌属
1G短杆菌数周鞭毛菌毛荚膜微荚膜 兼性厌氧菌
2肠埃希菌EMB板带金属光泽呈蓝紫色菌落麦康凯SS琼脂呈粉红色菌落双糖铁发酵（KIA）产酸产气IMViC试验结果＋＋－－
5肠埃希菌肠道外感染尿系统感染常见肾盂肾炎
肠道感染：（1）产毒素性（ETEC）：引起旅游者腹泻婴腹泻
（2）肠致病性（EPEC）：婴腹泻
（3）肠侵袭性（EIEC）：类似志贺菌肠炎症状里急重
（4）肠出血性（EHEC）：常见血清型O157：H7引起出血性肠炎见婴幼引起溶血性尿毒症
（5）肠粘附性（EaggEC）：婴急性水样腹泻
●志贺菌属
1G短杆菌荚膜芽胞鞭毛菌毛需氧兼性厌氧
2志贺菌属细菌性痢疾常见病原菌中国常见福氏（B群）宋氏（D群）
3志贺菌属SS培养基中国蓝（麦康凯）板菌落红色粉红色
4志贺菌没鞭毛没H抗原O抗原K抗原
5志贺菌引起腹泻常里急重
●沙门菌属
1G直杆菌芽胞荚膜周鞭毛（鸡沙门菌）数菌毛
2SS琼脂麦康凯琼脂培养基：约2～4mm透明半透明菌落胆盐耐受产H2S者SS琼脂形成黑色中心菌落
3伤寒沙门菌抗原包括菌体（O）抗原鞭毛（H）抗原表面（Vi）抗原
4伤寒沙门菌检测肥达试验：已知伤寒沙门菌OH抗原副伤寒甲乙H抗原稀释检血清作定量凝集试验检测患者血清中抗体含量判断机体否受沙门菌感染导致肠热症判沙门菌种类
5菌体（O）抗原刺激机体产生抗体IgMH抗原IgG
6伤寒沙门菌感染1周取血液标2～3周取粪便3周取尿液
7致疾病：肠热症伤寒副伤寒病食物中毒 慢性肠炎败血症沙门菌局部感染颈部腰部等
●变形杆菌属
1G杆菌形周鞭毛芽胞荚膜
2营养求高普通培养基呈迁徙生长苯丙氨酸脱氨酶试验阳性重生化鉴反应
3变形杆菌X19X2Xk等类型O抗原立克次体抗原成分发生外斐反应
●耶尔森菌属4普通变性杆菌引起食物中毒奇异变性杆菌引起婴幼肠炎
1鼠疫耶尔森菌鼠疫病原菌国列甲类传染病
2鼠疫耶尔森菌G杆菌球杆状两极浓染荚膜鞭毛芽胞
3鼠疫耶尔森菌血板菌落柔软黏稠液体培养基中开始浑浊生长24时沉淀生长48时形成菌膜摇动呈钟乳石状沉半固体穿刺呈树状生长
4肠结肠耶尔森菌22～25℃培养周鞭毛呈翻滚螺旋运动35℃时培养该菌动力适生长温度20～28℃
5肠结肠耶尔森菌畜患病原菌
●弧菌属
1弧菌科氧化酶阳性动力阳性G细菌包括弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属等
2霍乱弧菌根生物学特性差异分古典生物型Eltor生物型两生物型两生物型抗原属O1群霍乱弧菌
3O1群霍乱弧菌根菌体抗原含ABC 3种抗原子分川型稻叶型彦岛型川型稻叶型常见流行型
4霍乱运动呈穿梭状流星状排列呈鱼群状亚碲酸钾培养基褐色菌落培养基碱性蛋白胨水致病物质霍乱肠毒素患者便呈米泔样便
5霍乱弧菌鉴培养硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂板（TCBS）
6霍乱弧菌碱性蛋白胨水生长迅速适pH84～92
7霍乱弧菌O1群O139群引起霍乱O2～O138群引起类胃肠炎称非O1群霍乱弧菌
8霍乱弧菌生物分型
9霍乱弧菌采集标时碱性蛋白胨水中增菌应置文腊二氏保存液活卡布运送培养基中专运送
10副溶血性弧菌种嗜盐菌常存海水海类产品中海区食物中毒常见病原菌
11副溶血性弧菌霍乱区蔗糖发酵试验前者发酵蔗糖TCBS呈蓝绿色菌落者呈黄色菌落
12副溶血性弧菌兔红细胞发生溶血马红细胞溶血称神奈川现象
●菌属特征高频考点
1肺炎克雷伯菌动力鸟氨酸脱羧酶阴性黏液状菌落接种环拉丝特征
2结：志贺菌IMViC（+）肠埃希菌IMViC（++）产气肠杆菌IMViC（++）
3气单胞菌属运动活泼血板形成扁β溶血性菌落嗜水气单胞菌豚鼠气单胞菌发酵阿拉伯糖
4邻单胞菌属引起水样腹泻志贺菌类似引起食物中毒
5假单胞菌属产检杆菌属动杆菌属等发酵葡萄糖均非发酵革兰阴性杆菌
6铜绿假单胞菌专性需氧菌普通培养基菌落生姜味产生水溶性绿色素血板产生透明溶血环该菌42℃生长通该试验区分假单胞菌
7铜绿假单胞菌引起泌尿道皮肤呼吸道烧伤创面感染等导致菌血症败血症心膜炎囊性纤维变性婴幼严重腹泻等
8动杆菌属三阴特征氧化酶动力硝酸盐原试验均阴性
9流感嗜血杆菌产生溶酶生长需ⅤⅩ子培养特殊求营养求高初次分离需5～10CO2巧克力板金黄色葡萄糖球菌（产生ⅤⅩ子）时候会出现卫星生长现象
嗜血杆菌菌落呈露滴状
副流感嗜血杆菌形态菌落 流感嗜血杆菌相似产生卫星现象生长程中需V子需X子
10军团菌属培养求特殊培养基中必须含半胱氨酸铁培养基活性炭酵母浸液琼脂培养基（BCYE）传播途径空气
12布鲁菌属畜患病原菌包括羊牛猪狗绵羊布鲁菌等引起布病果做题什草原养羊羊接触史话选布鲁菌感染
13弯曲菌属分解糖类氧化酶阳性分离培养时培养基中需含量抗生素初次分离须5O210CO285N2气体环境中生长
14幽门螺杆菌呈海鸥状弯曲脲酶强阳性（快速分解尿素）特征标采集部位胃十二指肠
15白喉棒状杆菌特异性标志异染颗粒亚碲酸钾培养基黑色菌落培养基选吕氏血清斜面亚碲酸钾致
19炭疽芽孢杆菌毫升含005～05U青霉素培养基中发生形态变异形成均匀圆球状相连串珠状称串
抗酸染色分级报告标准：①－：连续观察300视野未发现抗酸杆菌②±：1～2条300视野③1＋：1～9抗酸杆菌条100视野④2＋：1～9条抗酸杆菌10视野⑤3＋：1～9条抗酸杆菌视野⑥4＋：≥10条抗酸杆菌视野
27麻风分枝杆菌典型胞寄生细胞呈泡沫状称麻风细胞犰狳菌高度敏感菌良动物模型抗酸染色阳性杆菌
28厌氧菌属特征氧条件生长怀疑厌氧菌感染疱肉培养基培养
29破伤风梭菌严格厌氧周鞭毛荚膜芽胞呈正圆形宽菌体位菌体顶端细菌呈鼓槌状菌致病物质外毒素包括破伤风痉挛毒素破伤风溶血毒素引起强直性痉挛
30产气荚膜梭菌引起气性坏疽牛乳培养基中汹涌发酵生长特征
31肉毒梭菌引起食物中毒致病物质肉毒毒素已知剧烈神外毒素怀疑食物中毒患者血清中检出毒素直接效方法
32艰难梭菌引起腹泻假膜性肠炎
33衣原体细胞专性寄生独特发育周期：①原体高度感染性繁殖力②始体（网状体）繁殖力没感染性发育周期40～72h
34沙眼衣原体培养McCoy细胞鹦鹉热衣原体肺炎衣原体Hela299细胞培养
35沙眼衣原体引起四种疾病：①沙眼②包涵体结膜炎致盲素包涵体结膜炎③泌尿生殖道感染非淋菌性生殖道感染病原男性尿道炎常见病④性淋巴肉芽肿：称第四性病
36鹦鹉热衣原体气溶胶传播引起非典型肺炎（畜患病原体）
37肺炎衣原体呼吸道传播引起肺炎
38支原体细胞壁工培养基生长通细菌滤器原核细胞型微生物典型特征菌落荷包蛋样治疗药物首选红霉素
39肺炎支原体通呼吸道传播引起原发性非典型肺炎
40解脲支原体通性传播引起非淋菌性尿道炎
41立克次体细胞寄生头痛发热皮疹中枢神病特征立克次体重试验外斐试验非特异性凝集试验
42立克次体工培养检测利变性杆菌公抗原检测（抗原）OX19应流行性斑疹伤寒鼠型斑疹伤寒OX2应斑点热OXK应恙虫病
43钩端螺旋体通疫水传播典型畜患病鼠猪常见储存宿传染源种然疫源性疾病治疗药物首选青霉素
44梅毒螺旋体密螺旋体镀银染色
45梅毒三期分型期硬疳二期梅毒疹三期梅毒瘤
46早期梅毒传染性强破坏力晚期破坏力传染性
47梅毒通性传播输血传播垂直传播
48梅毒检查非特异性试验牛心类脂质WHO推荐VDRL（性病研究实验室试验）RPR（快速血浆反应素试验）做筛查确诊试验TPPA
49放线菌患者病灶硫磺颗粒菌体呈菊花状菌落R型转变S型
50诺卡菌属星型诺卡巴西诺卡致病星型诺卡菌落表面白色菌丝巴西诺卡表面白色菌丝诺卡菌属抗酸染色弱阳性诺卡菌革兰氏阳性杆菌细长菌丝菌丝末端膨色素颗粒压碎染色镜检见颗粒呈菊花状种类产生色素橙红粉红黄黄绿紫颜色巴西诺卡菌七叶苷黄嘌呤肌醇甘露醇均阳性星型分解黄嘌呤
●真菌常见考点
1真菌检测标皮屑指甲头发等需10KOH处理
2真菌培养般选沙氏培养基
3白假丝酵母菌鉴点：①芽形成试验（＋）②厚膜孢子形成试验（＋）③脲酶试验（－）④形成假菌丝⑤革兰阳性
4新型隐球菌鉴点：①墨汁染色黑色背景见透亮菌体宽厚荚膜②沙保弱培养基生成酵母型菌落③脲酶试验（＋）
5艾滋病易合感染真菌卡氏肺孢子菌
6黄曲霉菌产生黄曲霉毒素致癌
●病毒常见考点
1病毒非细胞型微生物基结构核心衣壳
2流感病毒包膜RNA病毒包膜血凝素（HA）神氨酸酶（NA）重表面抗原中HA极易发生变异病毒命名方式HXNX（X型号H1N1H2N2等）
3麻疹病毒单股包膜RNA病毒引起病毒血症发病2天口腔黏膜出现白色外绕红晕黏膜斑（早期诊断重意义）患者皮肤相继出现红色版丘疹常见发症肺炎
4腮腺炎病毒包膜RNA病毒感染引起侧双侧腮腺肿青春期感染者男性易发睾丸炎
5甲型肝炎病毒（HAV）包膜RNA病毒传播途径粪口传播引起甲肝引起病毒血症产生甲肝抗体IgMELISA检测捕获法
6乙型肝炎病毒（HBV）DNA病毒引起乙肝严重发展肝癌
常见考点：①HBV球型颗粒（Dane）感染性②乙肝两半：HBsAg抗HBsHBeAg抗HBe抗HBc③三阳指HBsAgHBeAg抗HBc均阳性种模式急性乙肝传染性极强④三阳指HBsAg抗HBe抗HBc种模式感染趋恢复期⑤乙肝保护性抗体指抗HBs⑥HBeAg阳性表示乙肝传染性极强⑦抗HBs抗HBs抗HB
16细菌特殊结构包括：鞭毛菌毛荚膜芽胞
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